Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit
Figure 1. Bioluminescent reactions catalyzed by firefly luciferase??and?Renilla?luciferase.??
將報(bào)告基因細(xì)胞裂解液充分混勻后，按如下方式加入報(bào)告基因細(xì)胞裂解液，充分裂解細(xì)胞。
注：裂解產(chǎn)物可室溫保存?6 h，-70℃可長(zhǎng)期存放(裂解產(chǎn)物不能反復(fù)凍融);
2.?????Preparation of Firefly Working Solution
2.2)?配置10 mg/mL D-luciferin儲(chǔ)存液。2mg組份E溶解在200uL超純水中。儲(chǔ)存液-20℃可以儲(chǔ)存6個(gè)月反復(fù)凍融5次。
2.3）工作液配置 ：用組分?B?按照1:50稀釋以上D-luciferin儲(chǔ)存液，配制成?0.2 mg/mL?的螢火蟲螢光素酶工作液。
注：螢火蟲螢光素酶工作液不能反復(fù)凍融超過(guò)5次，若單次實(shí)驗(yàn)用量較少，建議按單次使用量分裝成小規(guī)格。
3.?????Preparation of Renilla Working Solution
3.2)?配置2 mg/mL Coelenterazine儲(chǔ)存液。400ug組份C溶解在200uL超純水中。儲(chǔ)存液-20℃可以儲(chǔ)存3個(gè)月反復(fù)凍融5次。
3.3）工作液配置 ：用組分?D?按照1:50稀釋以上coelenterazine儲(chǔ)存液，配制成?0.04 mg/mL?的1x?coelenterazine工作液。
注：1×Coelenterazine工作液現(xiàn)配現(xiàn)用，配置后在3小時(shí)內(nèi)使用。
4.1）按儀器操作說(shuō)明書開啟具有檢測(cè)化學(xué)發(fā)光功能的儀器如酶標(biāo)儀。
4.3）加入?100uL螢火蟲螢光素酶檢測(cè)液，用槍吹打均勻或用其它適當(dāng)方式混勻后測(cè)定?RLU（relative light unit）值。
注：由于該發(fā)光為瞬時(shí)發(fā)光，建議加入螢火蟲螢光素酶工作液后，立即進(jìn)行檢測(cè)。
4.4）加入?100uL 1× Coelenterazine?工作液，用槍吹打均勻或用其它適當(dāng)方式混勻后測(cè)定?RLU（relative light unit）值。
2)?由于溫度對(duì)酶反應(yīng)有影響，所以測(cè)定時(shí)，樣品和試劑均需達(dá)到室溫后再進(jìn)行測(cè)定。
3?本公司所有產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員用于生命科學(xué)研究，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅。
4)?本公司所有產(chǎn)品必須由合格專業(yè)技術(shù)人員操作同時(shí)佩戴口罩/手套/實(shí)驗(yàn)服并遵守生物實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)程！
