Super Green qPCR mix (~Sybr Green qPCR mix，None/Low/High ROX & Universal)

Super Green qPCR mix?(~Sybr Green ?qPCR mix）(None/Low/High ROX & Universal)?包裝量：組成50次x 50μL反應(yīng)體系200次x 50μL反應(yīng)體系2×?Super Green qPCR Mix1.25 mL1.25 mL×4?產(chǎn)品儲(chǔ)存：?-20 ℃?避光保存12個(gè)月，使用前充分溶解混勻。Mix?融解后可在?4℃避光條件下穩(wěn)定存放一個(gè)月，盡量避免反復(fù)凍融。產(chǎn)品簡(jiǎn)介：本制品是采用Super Green（~Sybr Green）嵌合熒光法進(jìn)行Real Time PCR的專用試劑，為?2×?預(yù)混液。已經(jīng)將DNA聚合酶、dNTP、特殊穩(wěn)定劑、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液、BSA和SYBR Green I等試劑預(yù)混成一種適合Real Time P...

詳細(xì)信息

Super Green qPCR mix?(~Sybr Green ?qPCR mix）(None/Low/High ROX & Universal)

包裝量：

組成	50次x 50μL反應(yīng)體系	200次x 50μL反應(yīng)體系
2×?Super Green qPCR Mix	1.25 mL	1.25 mL×4

產(chǎn)品儲(chǔ)存：?-20 ℃?避光保存12個(gè)月，使用前充分溶解混勻。Mix?融解后可在?4℃避光條件下穩(wěn)定存放一個(gè)月，盡量避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本制品是采用Super Green（~Sybr Green）嵌合熒光法進(jìn)行Real Time PCR的專用試劑，為?2×?預(yù)混液。已經(jīng)將DNA聚合酶、dNTP、特殊穩(wěn)定劑、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液、BSA和SYBR Green I等試劑預(yù)混成一種適合Real Time PCR反應(yīng)檢測(cè)用2×Premix Type試劑,?使用時(shí)只需加入模板、引物和水，可減少操作步驟，縮短加樣時(shí)間，降低污染幾率,?具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)。其核心組分是抗體修飾的熱啟動(dòng)?Taq DNA?聚合酶，配合精心優(yōu)化的Buffer體系，有效抑制非特異性擴(kuò)增，可對(duì)寬廣濃度范圍的模板進(jìn)行準(zhǔn)確定量，獲得穩(wěn)定可靠的?qPCR?結(jié)果，可在寬廣的定量區(qū)域內(nèi)得到良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)目的基因進(jìn)行準(zhǔn)確定量檢測(cè)，重復(fù)性好，可信度高。

使用方法

1.?注意事項(xiàng)：?所有產(chǎn)品僅限用于研發(fā)，必須生物技術(shù)人員操作同時(shí)佩戴口罩/手套/實(shí)驗(yàn)服并遵守生物實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)程！

1)???????本制品不含參比染料ROX，客戶可根據(jù)qPCR儀器技術(shù)指導(dǎo)決定是否需要加ROX參比染料，用于消除信號(hào)本底以及校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號(hào)誤差。

2)???????本制品含Super Green I?強(qiáng)光下易分解，降低靈敏度，使用時(shí)避免長(zhǎng)時(shí)間強(qiáng)光照射本制品。

3)???????建議在冰上配制PCR反應(yīng)液，再放入PCR儀器中擴(kuò)增?？梢蕴岣邤U(kuò)增特異性，減少背景。

4)???????使用前上下顛倒輕輕混勻?Mix，請(qǐng)勿渦旋振蕩混勻，避免產(chǎn)生過(guò)多氣泡。

2.?實(shí)驗(yàn)優(yōu)化?若使用默認(rèn)反應(yīng)條件反應(yīng)性能不佳時(shí)，則需要進(jìn)行反應(yīng)條件的優(yōu)化，可以從引物濃度以及擴(kuò)增程序兩個(gè)方面進(jìn)行：

①?引物濃度調(diào)整：當(dāng)引物終濃度在0.1~1.0μM范圍之間變化時(shí)，引物濃度越低,?擴(kuò)增特異性越高，但擴(kuò)增效率會(huì)有所下降。

②?擴(kuò)增程序優(yōu)化：需提高擴(kuò)增特異性，可使用兩步法程序或提高退火溫度；需提高擴(kuò)增效率，可使用三步法程序或延長(zhǎng)延伸時(shí)間。

3.?引物設(shè)計(jì)原則：

a)???????擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度建議控制在?80~200 bp；引物長(zhǎng)度為?18~25 bp；

b)???????正向引物和反向引物的?Tm?值相差不超過(guò)?1℃為佳，Tm值控制在58~62℃為佳；

c)???????引物的?GC?含量控制在?40%~60%?之間；引物?3'?端最后一個(gè)堿基最好為?G?或者?C；

d)???????引物?A、G、C、T?整體分布盡量要均勻，避開(kāi)?T/C?或者?A/G?的連續(xù)結(jié)構(gòu)（特別是?3'?端）；

e)???????避開(kāi)引物內(nèi)部或者兩條引物之間的互補(bǔ)序列；

f)???????使用NCBI BLAST功能檢索確認(rèn)引物的特異性。

4.?建議PCR反應(yīng)體系（以50μL反應(yīng)體系為例，反應(yīng)液配制請(qǐng)?jiān)诒线M(jìn)行）

Components	Volume	Final Concentration
2×?Super Green qPCR Mix	25 μL	1×
DNA Template??DNA模版	2 μL	50～1000ng/50uL (最低可達(dá)5pg/50uL)
Forward Primer (10 μM)??正向引物	1 μL	0.2 μM each
Reverse Primer (10 μM)??反向引物	1 μL	0.2 μM each
ddH2O to final volume總體積調(diào)節(jié)到50uL	To 50μL	Not applicable

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5. qPCR?反應(yīng)程序（可根據(jù)機(jī)型適當(dāng)調(diào)整）

三步法			兩步法
步驟	溫度	時(shí)間	步驟	溫度	時(shí)間
預(yù)變性	95 ℃	30sec	預(yù)變性	95 ℃	30sec
變性	95 ℃	10sec	變性	95 ℃	10sec
退火^a	55～65℃	10sec	退火^a&延伸^a	60℃	30sec
延伸^a	72 ℃	30sec	退火^a&延伸^a	60℃	30sec
溶解曲線^b	使用儀器默認(rèn)采集程序		溶解曲線^b	使用儀器默認(rèn)采集程序

a.?根據(jù)引物的Tm?值進(jìn)行退火（退火&?延伸）溫度的設(shè)定；若擴(kuò)增片段在200 bp?以內(nèi)，延伸（退火&?延伸）時(shí)間可以設(shè)置為15 sec；此外，延伸時(shí)間的設(shè)置還需根據(jù)qPCR?儀所需要的數(shù)據(jù)采集最短時(shí)間限制自行調(diào)整；

b.?不同qPCR?儀的熔解曲線采集程序有差別，一般可使用儀器默認(rèn)的熔解曲線采集程序。

6.?適配機(jī)型：

產(chǎn)品	適用機(jī)型	25uM ROX?用量 (50uL PCR反應(yīng)體系）	ROX?終濃度
2×?Super Green qPCR Mix （none ROX）	Bio-Rad CFX?全系列； Roche LightCycler??系列； Eppendorf Mastercycler? ep realplex?系列； Qiagen/Corbett Rotor-Gene??系列；? Takara Thermal Cycler Dice； Analytikjena qTOWER系列等	0uL	? 0nM
2×?Super Green qPCR Mix （Low ROX）	ABI 7500/7500 Fast，ABI ViiA 7?； ABI QuantStudio???系列； Stratagene Mx3000P?/3005P?/4000?	0.05uL (0.05uL~0.1uL)	25nM~50nM
2×?Super Green qPCR Mix （High ROX）	ABI 7000/7300/7700/7900 HT/7900 HT Fast， StepOne?，StepOne Plus??等	0.5uL (0.5uL~1uL)	250nM~500nM

常見(jiàn)問(wèn)題：


問(wèn)題描述	可能原因	解決辦法
擴(kuò)增曲線不光滑	熒光信號(hào)太弱，經(jīng)系統(tǒng)校正后產(chǎn)生	確保?Mix?中預(yù)混的染料未降解；更換熒光信號(hào)收集更好的?qPCR?專用耗材
擴(kuò)增曲線斷裂或下滑	模板濃度較高，基線的終點(diǎn)值大于Cq值	減小基線終點(diǎn)?(Cq?值?-4)，重新分析數(shù)據(jù)
個(gè)別孔擴(kuò)增曲線突然驟降	反應(yīng)管內(nèi)留有氣泡	確保?Mix?完全溶解，請(qǐng)勿渦旋振蕩混勻加樣完成后輕彈離心去除氣泡延長(zhǎng)預(yù)變性時(shí)間至?10 min，以去除氣泡
? 反應(yīng)結(jié)束無(wú)擴(kuò)增曲線出現(xiàn)	反應(yīng)循環(huán)數(shù)偏少	設(shè)置循環(huán)數(shù)為?40，但更多的循環(huán)數(shù)會(huì)增加過(guò)多的背景信號(hào)
	熒光信號(hào)采集步驟未設(shè)置或者設(shè)置錯(cuò)誤	兩當(dāng)步將法信擴(kuò)號(hào)增采程集序設(shè)一置般在將信號(hào)采集設(shè)置在退火?&?延伸階段，三步法擴(kuò)增程序應(yīng)72℃延伸階段
	引物可能降解	長(zhǎng)期未用的引物，應(yīng)先通過(guò)?PAGE?電泳檢測(cè)完整性，以排除其降解的可能
	模板濃度過(guò)低	減少模板稀釋倍數(shù)重復(fù)實(shí)驗(yàn)，樣品濃度未知的情況下先從最高濃度做起
	模板降解	重新制備模板，重復(fù)實(shí)驗(yàn)
? Cq?值出現(xiàn)過(guò)晚	擴(kuò)增效率低	提高引物濃度，嘗試三步法擴(kuò)增程序，或者重新設(shè)計(jì)引物
	模板濃度過(guò)低	減少模板稀釋倍數(shù)重復(fù)實(shí)驗(yàn)，樣品濃度未知的情況下先從最高濃度做起
	模板降解	重新制備模板，重復(fù)實(shí)驗(yàn)
	擴(kuò)增產(chǎn)物過(guò)長(zhǎng)	擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度控制在?80~200 bp
	體系中存在?P 熱門(mén)推薦雙層搖床 HY-6 往復(fù)式大型搖床 HY-A 脫色搖床 TY-A 水平分液漏斗振蕩器 FHY-6 雙層測(cè)速振蕩器 HY-6A 杭州杭研科技有限公司電話：18989454816 Q Q：46449281 Email：46449281@qq.com　友情鏈接 : 版權(quán)所有：杭州杭研科技有限公司浙ICP備19051104號(hào) 感谢您访问我们的网站，您可能还对以下资源感兴趣：国产亚洲人成网站在线观看_国产欧美日韩不卡一区_亚洲五月丁香在线免费观看_真人啪啪高潮呻吟无遮挡_国产激情无码一区二区免费_日韩三级在线播放_国产免费观看久久_亚洲国产精品无码av在线_欧美亚洲另类小说_欧洲黄色级黄色99片

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5. qPCR?反應(yīng)程序（可根據(jù)機(jī)型適當(dāng)調(diào)整）

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