Lipo2K轉(zhuǎn)染試劑

Lipo2K?Transfection Reagent保存：2-4℃保存一年。（避免冷凍）產(chǎn)品說(shuō)明?北京富百科生物技術(shù)有限公司利用自主技術(shù)脂質(zhì)體納米顆粒(LNP)遞送技術(shù)開發(fā)的轉(zhuǎn)染試劑Lipo2K?轉(zhuǎn)染效率較高介于Lip2K和Lip3K之間，是一種新型的陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑。適合于將核酸(DNA和RNA)轉(zhuǎn)染入真核細(xì)胞，具有低細(xì)胞毒性；對(duì)多種類型的細(xì)胞和培養(yǎng)板都具有高轉(zhuǎn)染效率；轉(zhuǎn)染時(shí)血清的存在不影響轉(zhuǎn)染效率的優(yōu)點(diǎn)。適用范圍：貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞（哺乳動(dòng)物細(xì)胞系）的轉(zhuǎn)染。質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染 (每次轉(zhuǎn)染一定要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，來(lái)摸索最佳條件,?尤其是轉(zhuǎn)染試劑的最佳用量!)?...

詳細(xì)信息

Lipo2K?Transfection Reagent

保存：2-4℃保存一年。（避免冷凍）

產(chǎn)品說(shuō)明

?北京富百科生物技術(shù)有限公司利用自主技術(shù)脂質(zhì)體納米顆粒(LNP)遞送技術(shù)開發(fā)的轉(zhuǎn)染試劑Lipo2K?轉(zhuǎn)染效率較高介于Lip2K和Lip3K之間，是一種新型的陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑。適合于將核酸(DNA和RNA)轉(zhuǎn)染入真核細(xì)胞，具有低細(xì)胞毒性；對(duì)多種類型的細(xì)胞和培養(yǎng)板都具有高轉(zhuǎn)染效率；轉(zhuǎn)染時(shí)血清的存在不影響轉(zhuǎn)染效率的優(yōu)點(diǎn)。

適用范圍：貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞（哺乳動(dòng)物細(xì)胞系）的轉(zhuǎn)染。

質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染 (每次轉(zhuǎn)染一定要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，來(lái)摸索最佳條件,?尤其是轉(zhuǎn)染試劑的最佳用量!)

???對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō)，DNA(μg)與Lipo2K (μl)的比例為1:2~1:3。轉(zhuǎn)染時(shí)高的細(xì)胞密度可以得到高的轉(zhuǎn)染效率和表達(dá)水平，并能減少細(xì)胞毒性。

1.?以24孔板為例

貼壁細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天，用500 μl不含抗生素的培養(yǎng)基接種0.5～2×10⁵細(xì)胞，使之第二天能達(dá)到70-90%匯合。

懸浮細(xì)胞：在準(zhǔn)備DNA-Lip2K復(fù)合物之前，用500 μl不含抗生素的培養(yǎng)基接種4～8×10⁵細(xì)胞即可。

2.?對(duì)每個(gè)轉(zhuǎn)染樣品，進(jìn)行以下操作

a.?在eppendorf管里分別加入50 μl Opti-MEM I ReLipced Serum Medium和0.8 μg DNA輕柔混勻，制成DNA稀釋液。

b.?在另一個(gè)eppendorf管里分別加入50μl Opti-MEMI ReLipced Serum Medium和2.0 μl Lipo2K(注意用前先混勻)，輕柔混勻，制成Lipo2K 稀釋液，室溫靜置5分鐘。

c.?將DNA稀釋液和Lipo2K稀釋液混合，輕柔混勻，室溫靜置20分鐘，形成DNA-Lipo2K復(fù)合物。DNA-Lipo2K復(fù)合物在室溫下可穩(wěn)定存在6小時(shí)。

3.?將DNA-Lipo2K復(fù)合物加入到接種好的細(xì)胞中，將培養(yǎng)板輕輕地前后搖動(dòng)，使復(fù)合物分散均勻。

4.?在37℃ CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-6小時(shí)后更換培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)18～48小時(shí)。

5.?如果要篩選穩(wěn)定細(xì)胞株，則在轉(zhuǎn)染24小時(shí)后將細(xì)胞按照1:10或更高的比例接種到新鮮培養(yǎng)基中，第二天加入選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。

質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染的優(yōu)化為達(dá)到最高的轉(zhuǎn)染效率和降低細(xì)胞毒性的影響，可以對(duì)DNA和Lipo2K的比例以及細(xì)胞密度進(jìn)行優(yōu)化，一般在1:0.5~1:5的范圍內(nèi)優(yōu)化DNA (μg)和Lipo2K (μl) 的比例。

不同細(xì)胞培養(yǎng)板中轉(zhuǎn)染時(shí)培養(yǎng)基、核酸及Lipo2K用量

常見(jiàn)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率（富百科熒光顯微鏡自測(cè)數(shù)據(jù)，僅供參考，實(shí)驗(yàn)條件不同轉(zhuǎn)染效率會(huì)有較大差別）

轉(zhuǎn)染效率的測(cè)定方法:?1)實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè); ?2)Western Blot檢測(cè); ?3)流式細(xì)胞術(shù)??4)熒光顯微鏡:?轉(zhuǎn)染含有熒光蛋白基因質(zhì)粒DNA，通過(guò)熒光顯微鏡觀察熒光的強(qiáng)弱以及熒光的效率。