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Dura ECL?特超敏發(fā)光液

Dura ECL?特超敏發(fā)光液

?Dura ECL? ?超敏發(fā)光液??DuraECL?,?FemtoECL?,PicoECL?,ECLplus?為北京富百科生物技術(shù)有限公司注冊(cè)商標(biāo),未經(jīng)授權(quán)嚴(yán)禁使用!保存:室溫運(yùn)輸,收到后在4℃避光下儲(chǔ)存試劑? Dura ECL??是一款具有特超高靈敏度的增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光(ECL)底物和特超長(zhǎng)發(fā)光時(shí)間的ECL發(fā)光液,也是目前我們富百科四款ECL發(fā)光液中發(fā)光時(shí)間最長(zhǎng)的化學(xué)發(fā)光底物,發(fā)光時(shí)間可長(zhǎng)達(dá)16h。由于采用了富百科的核心技術(shù)基于“熒光震蕩”機(jī)理設(shè)計(jì)的發(fā)光底物系統(tǒng)??赏℉RP實(shí)現(xiàn)實(shí)現(xiàn)低飛克級(jí)(以HRP濃度為準(zhǔn))的免疫印跡檢測(cè),其靈敏度,發(fā)光時(shí)間和背景均明顯優(yōu)秀。?...

?Dura ECL? ?超敏發(fā)光液

??DuraECL?,?FemtoECL?,PicoECL?,ECLplus?為北京富百科生物技術(shù)有限公司注冊(cè)商標(biāo),未經(jīng)授權(quán)嚴(yán)禁使用!

保存:室溫運(yùn)輸,收到后在4避光下儲(chǔ)存試劑

? Dura ECL??是一款具有特超高靈敏度的增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光(ECL)底物和特超長(zhǎng)發(fā)光時(shí)間的ECL發(fā)光液,也是目前我們富百科四款ECL發(fā)光液中發(fā)光時(shí)間最長(zhǎng)的化學(xué)發(fā)光底物,發(fā)光時(shí)間可長(zhǎng)達(dá)16h。由于采用了富百科的核心技術(shù)基于“熒光震蕩”機(jī)理設(shè)計(jì)的發(fā)光底物系統(tǒng)??赏℉RP實(shí)現(xiàn)實(shí)現(xiàn)低飛克級(jí)(以HRP濃度為準(zhǔn))的免疫印跡檢測(cè),其靈敏度,發(fā)光時(shí)間和背景均明顯優(yōu)秀。

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Dura ECL?是我們富百科的最高靈敏度和最長(zhǎng)發(fā)光時(shí)間的底物是用于辣根過(guò)氧化物酶(HRP)的增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光底物,有以下特點(diǎn):

??靈敏—使用適當(dāng)?shù)囊豢购投箷r(shí),可在硝化纖維膜或PVDF膜上檢測(cè)豐度為飛克級(jí)的蛋白條帶

??定量—所得信號(hào)的可定量檢測(cè)范圍跨越兩個(gè)數(shù)量級(jí)

??明亮信號(hào)—通過(guò)膠片或成像系統(tǒng)進(jìn)行曝光,易于捕獲圖像

??長(zhǎng)信號(hào)持續(xù)時(shí)間—優(yōu)化條件下,可檢測(cè)的光信號(hào)輸出長(zhǎng)達(dá)16小時(shí)

??穩(wěn)定試劑—試劑盒組分能夠在4°C條件下穩(wěn)定放置一年,在室溫下可穩(wěn)定放置6個(gè)月

??價(jià)格經(jīng)濟(jì)— 配方經(jīng)過(guò)優(yōu)化,可適用于濃度極低的抗體檢測(cè)

? 1ng至0.2 μg/mL一抗(以1 μg/mL儲(chǔ)存液稀釋1:5,000至1:100,000倍)

? 2ng至10 ng/mL二抗(以1 μg/mL儲(chǔ)存液稀釋1:100,000至1:500,000倍)

?當(dāng)Dura ECL底物與優(yōu)化的抗體濃度和封閉緩沖液配合使用時(shí),可檢測(cè)到常規(guī)ECL底物無(wú)法檢測(cè)的低豐度靶標(biāo)蛋白。

操作概述

??注:優(yōu)化抗原和抗體的濃度。必須使用建議的抗體稀釋度,以保證陽(yáng)性結(jié)果。有關(guān)建議的稀釋度范圍請(qǐng)參考其他所需材料。

1)??將一抗?jié)舛认♂尩?/span>1ng至0.2 ng/mL(以1 μg/mL儲(chǔ)存液稀釋1:5,000至1:100,000倍)

2)?將二抗?jié)舛认♂尩?/span>2ng至10 ng/mL(以1 μg/mL儲(chǔ)存液稀釋1:100,000至1:500,000倍)

3)?將兩種底物組份按1:1比例混合,制備底物工作液。

注:日光或任何其他強(qiáng)光可能損害工作液,為獲得最佳結(jié)果,將此工作液保存在琥珀色瓶中,并避免任何強(qiáng)光長(zhǎng)期照射。短時(shí)間實(shí)驗(yàn)室常規(guī)照明不會(huì)損害該工作液。

4)?將印跡膜在 Femto ECL底物工作液中孵育5分鐘。

5)?吸出多余試劑。用清潔的塑料膜蓋住該印跡膜。

6)??使印跡膜在X光膠片上曝光。

?

蛋白印跡法詳細(xì)操作步驟

1)?將印記膜從蛋白轉(zhuǎn)印設(shè)備中取出,加入合適的封閉液在溫室下孵育20-60分鐘,同時(shí)振蕩。以封閉膜上非特異性蛋白結(jié)合位點(diǎn)。請(qǐng)注意:使用在前文建議的抗體稀釋度是非常重要的。

?2)?將膜從封閉液中取出,與一抗工作液在溫室孵育1小時(shí),同時(shí)振蕩;或在28℃孵育過(guò)夜,不振蕩。

?3)?將足量的洗滌緩沖液加至膜上,保證緩沖液將膜完全覆蓋。振蕩孵育≥5分鐘,更換洗滌緩沖液并重復(fù)該步驟4-6次。增加洗滌緩沖液體積,洗滌次數(shù)和洗滌時(shí)間有助于降低背景信號(hào)。

注:孵育前,膜在洗滌緩沖液中的短暫淋洗會(huì)提高洗滌效率。

請(qǐng)注意:使用在前文建議的HRP標(biāo)記二抗稀釋度是非常重要的。

?4)?將HRP標(biāo)記的二抗工作液與膜在溫室孵育1小時(shí),同時(shí)振蕩。

?5)?重復(fù)步驟3,以除去未結(jié)合的HRP標(biāo)記二抗。注:膜與HRP標(biāo)記二抗孵育后必須進(jìn)行徹底洗滌。

?6)?將A溶液與B液等比例混合,制備成工作液。每cm2膜使用0.01~0.1ml工作液。工作液可以在溫室下穩(wěn)定8小時(shí)。注:日光或任何其他強(qiáng)光下可能損害工作液,為獲得最佳結(jié)果,將此工作液保存在琥珀色瓶中,并避免任何強(qiáng)光長(zhǎng)期照射,短時(shí)間實(shí)驗(yàn)室常規(guī)照明不會(huì)損害該工作液。

?7)?將印記膜在工作液中孵育5分鐘。

?8)?從工作液中取出印記膜,并置于一個(gè)塑料片或清潔的塑料紙(膜)中,用一張吸水紙吸除多余的液體,并從印記和塑料紙之間小心地壓出氣泡。

?9)?將包在塑料紙(膜)中的印記膜置于膠片暗盒中,蛋白質(zhì)面朝上,除適用于膠片曝光的燈(如紅色安全燈)之外,關(guān)閉所有的燈。

注;膠片必須在曝光期間保持干燥,為獲得最佳效果,采取以下措施:

*?? 確保將多余的底物從膜和塑料紙上完全去除。

*?? 在整個(gè)膠片處理期間,使用手套。

*?? 切莫將印記膜置于已顯影的膠片上,因?yàn)槟z片上的化學(xué)物質(zhì)會(huì)減弱信號(hào)。

?10)?將X光膠片置于膜的上面。建議第一次曝光60秒。之后可調(diào)整曝光時(shí)間以達(dá)到最佳結(jié)果?;瘜W(xué)發(fā)光反應(yīng)在底物孵育后的前5-30分鐘期間是最強(qiáng)烈的。這一反應(yīng)可以持續(xù)幾個(gè)小時(shí),但強(qiáng)度會(huì)隨時(shí)間下降,如有底物孵育后較長(zhǎng)時(shí)間后曝光,曝光時(shí)間可能需要延長(zhǎng)以獲得較強(qiáng)信號(hào)。如果使用磷光存儲(chǔ)成像設(shè)備(如Bio-Rad的分子成像儀系統(tǒng))或CCD照相機(jī)可能需要較長(zhǎng)的曝光時(shí)間。

????警告:膠片與膜之間的任何移動(dòng)可能在膠片上造成人為的非特異信號(hào)。

11)?使用合適的顯影劑和定影劑對(duì)膠片進(jìn)行顯影。如果信號(hào)太強(qiáng),則縮短曝光時(shí)間或?qū)⒂∮浤みM(jìn)行剝離并降低抗體濃度重新檢測(cè)。

常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

問(wèn)題

可能問(wèn)題

解決方案

膠片上有反轉(zhuǎn)像(即黑色背景,白色帶)

?

系統(tǒng)中HRP過(guò)多

?

將HRP標(biāo)記二抗稀釋至少10倍

膜上有褐色或黃色帶

印記在暗室中發(fā)光

信號(hào)持續(xù)時(shí)間少于8小時(shí)

?

信號(hào)弱或無(wú)信號(hào)

系統(tǒng)中過(guò)多的HRP耗盡了底物并導(dǎo)致信號(hào)迅速衰減

將HRP標(biāo)記二抗稀釋至少10倍

抗原或抗體的量不足

增加抗體或抗原的量

蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移率低

優(yōu)化轉(zhuǎn)印

HRP或底物活性低

見(jiàn)下文注釋

?

高背景

系統(tǒng)中HRP過(guò)多

將HRP標(biāo)記二抗稀釋至少10倍

封閉不充分

優(yōu)化封閉條件

封閉式機(jī)不合適

嘗試一種不同的封閉試劑

洗滌不充分

增加洗滌時(shí)間、次數(shù)或洗滌緩沖液體積

膠片過(guò)度曝光

縮短曝光時(shí)間或使用背景消除劑

抗原或抗體的濃度太高

減少抗體或抗原的量

?

蛋白質(zhì)條內(nèi)有斑點(diǎn)

蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)膜效率低

優(yōu)化轉(zhuǎn)印流程

膜的水化不均勻

按照制造商建議適度的使膜水化

膠片與膜之間存在氣泡

在膠片曝光前,去除氣泡

膠片上背景有斑點(diǎn)

HRP標(biāo)記二抗中存在聚集物

使用0.2um的過(guò)濾器

非特異性條帶

系統(tǒng)中HRP過(guò)多

將HRP標(biāo)記二抗稀釋至少10倍。

SDS導(dǎo)致的蛋白非特異性結(jié)合

在檢測(cè)過(guò)程中不使用SDS

*為檢測(cè)系統(tǒng)活性,在暗室中,在一個(gè)清潔試管中制備1-2ml底物工作液。關(guān)閉燈,添加1ul未稀釋的HRP標(biāo)記二抗工作液。該溶液應(yīng)當(dāng)立即發(fā)出藍(lán)色光,藍(lán)光信號(hào)在隨后的幾分鐘漸淡。

?

不同ECL發(fā)光液檢測(cè)靈敏度

產(chǎn)品名稱(chēng)

檢測(cè)濃度

推薦一抗孵育濃度(ng/mL)

推薦二體孵育濃度(ng/mL)

ECL plus

皮克級(jí)~10-12g

一抗?jié)舛龋?00~500

二抗?jié)舛龋?0~50

Pico ECL

皮克級(jí)至飛克級(jí)10-12g~10-15g

一抗?jié)舛龋?0~200

二抗?jié)舛龋?~50

Femto ECL?

小于飛克級(jí)<10-15g

一抗?jié)舛龋?~100

二抗?jié)舛龋?~20

Dura ECL

小于飛克級(jí)<10-15g

一抗?jié)舛龋?~100

二抗?jié)舛龋?~10

特別提醒:

1) 本公司所有產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員用于生命科學(xué)研究,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅。

2)?本公司所有產(chǎn)品必須由合格專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員操作同時(shí)佩戴口罩/手套/實(shí)驗(yàn)服并遵守生物實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)程!

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