Femto ECL?化學(xué)發(fā)光底物 說明書
?DuraECL?,?FemtoECL?，PicoECL?，ECLplus?為北京富百科生物技術(shù)有限公司注冊商標(biāo)，未經(jīng)授權(quán)嚴(yán)禁使用！
保存：室溫運(yùn)輸，收到后在4℃避光下儲(chǔ)存試劑
FemtoECL特超高靈敏度底物是用于辣根過氧化物酶(HRP)的增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光底物，有以下特點(diǎn)：
? 靈敏—使用適當(dāng)?shù)囊豢购投箷r(shí)，可在硝化纖維膜或PVDF膜上檢測豐度為飛克級(jí)的蛋白條帶
? 定量—所得信號(hào)的可定量檢測范圍跨越兩個(gè)數(shù)量級(jí)
? 明亮信號(hào)—通過膠片或成像系統(tǒng)進(jìn)行曝光，易于捕獲圖像
? 長信號(hào)持續(xù)時(shí)間—優(yōu)化條件下，可檢測的光信號(hào)輸出長達(dá)8小時(shí)
? 穩(wěn)定試劑—試劑盒組分能夠在4°C條件下穩(wěn)定放置一年，在室溫下可穩(wěn)定放置6個(gè)月
? 價(jià)格經(jīng)濟(jì)— 配方經(jīng)過優(yōu)化，可適用于濃度極低的抗體檢測
? 1ng至0.2 μg/mL一抗（以1 μg/mL儲(chǔ)存液稀釋1:5,000至1:100,000倍）
? 2ng至10 ng/mL二抗（以1 μg/mL儲(chǔ)存液稀釋1:100,000至1:500,000倍）
?當(dāng)Femto ECL底物與優(yōu)化的抗體濃度和封閉緩沖液配合使用時(shí)，可檢測到常規(guī)ECL底物無法檢測的低豐度靶標(biāo)蛋白。
重要提示:?所有產(chǎn)品僅限用于研發(fā)，必須生物技術(shù)人員操作同時(shí)佩戴口罩/手套/實(shí)驗(yàn)服并遵守生物實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)程！
? 注：優(yōu)化抗原和抗體的濃度。必須使用建議的抗體稀釋度，以保證陽性結(jié)果。有關(guān)建議的稀釋度范圍請參考其他所需材料。
1)? 將一抗?jié)舛认♂尩?/span>1ng至0.2 ng/mL（以1 μg/mL儲(chǔ)存液稀釋1:5,000至1:100,000倍）
2) 將二抗?jié)舛认♂尩?/span>2ng至10 ng/mL（以1 μg/mL儲(chǔ)存液稀釋1:100,000至1:500,000倍）
4) 將印跡膜在 Femto ECL底物工作液中孵育5分鐘。
l? 已完成轉(zhuǎn)印的印跡膜：用合適的電泳法分離蛋白質(zhì)，并將這些蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上。
l? 洗滌緩沖液：將5mL 10%的Tween-20加入1000mL稀釋緩沖液（Tween-20的終濃度將0.05%）。
l? 封閉試劑：將0.5mL10%的Tween-20加入100mL的封閉緩沖液，選擇一種與稀釋緩沖液具有相同基本組分的封閉緩沖液。
l? 一抗： 選擇一種目標(biāo)蛋白質(zhì)特異性抗體。使用稀釋緩沖液制備該抗體的儲(chǔ)存液。使用封閉試劑將抗體從儲(chǔ)備液稀釋成抗體工作液。最佳稀釋度取決于一抗和膜上的抗原量。
?2) 將膜從封閉液中取出，與一抗工作液在溫室孵育1小時(shí)，同時(shí)振蕩；或在28℃孵育過夜，不振蕩。
注：孵育前，膜在洗滌緩沖液中的短暫淋洗會(huì)提高洗滌效率。
請注意：使用在前文建議的HRP標(biāo)記二抗稀釋度是非常重要的。
?4) 將HRP標(biāo)記的二抗工作液與膜在溫室孵育1小時(shí)，同時(shí)振蕩。
?5) 重復(fù)步驟3，以除去未結(jié)合的HRP標(biāo)記二抗。注：膜與HRP標(biāo)記二抗孵育后必須進(jìn)行徹底洗滌。
?6) 將A溶液與B液等比例混合，制備成工作液。每cm2膜使用0.01～0.1ml工作液。工作液可以在溫室下穩(wěn)定8小時(shí)。注：日光或任何其他強(qiáng)光下可能損害工作液，為獲得最佳結(jié)果，將此工作液保存在琥珀色瓶中，并避免任何強(qiáng)光長期照射，短時(shí)間實(shí)驗(yàn)室常規(guī)照明不會(huì)損害該工作液。
?8) 從工作液中取出印記膜，并置于一個(gè)塑料片或清潔的塑料紙（膜）中，用一張吸水紙吸除多余的液體，并從印記和塑料紙之間小心地壓出氣泡。
?9) 將包在塑料紙（膜）中的印記膜置于膠片暗盒中，蛋白質(zhì)面朝上，除適用于膠片曝光的燈（如紅色安全燈）之外，關(guān)閉所有的燈。
注;膠片必須在曝光期間保持干燥，為獲得最佳效果，采取以下措施：
*?? 切莫將印記膜置于已顯影的膠片上，因?yàn)槟z片上的化學(xué)物質(zhì)會(huì)減弱信號(hào)。
?? ?警告：膠片與膜之間的任何移動(dòng)可能在膠片上造成人為的非特異信號(hào)。
11) 使用合適的顯影劑和定影劑對膠片進(jìn)行顯影。如果信號(hào)太強(qiáng)，則縮短曝光時(shí)間或?qū)⒂∮浤みM(jìn)行剝離并降低抗體濃度重新檢測。
1) 本公司所有產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員用于生命科學(xué)研究，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅。
2)?本公司所有產(chǎn)品必須由合格專業(yè)技術(shù)人員操作同時(shí)佩戴口罩/手套/實(shí)驗(yàn)服并遵守生物實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)程！
