???DuraECL?,?FemtoECL?,PicoECL?,ECLplus?為北京富百科生物技術(shù)有限公司注冊商標(biāo),未經(jīng)授權(quán)嚴(yán)禁使用!
保存:室溫運(yùn)輸,收到后在4℃避光下儲(chǔ)存試劑
?????? ?表1:與 Pico ECL化學(xué)發(fā)光底物,一起使用的抗體稀釋度范圍
? PicoECL —用于辣根過氧化物酶(HRP)的增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光底物
? 低皮克級靈敏度—檢測硝化纖維素膜或PVDF膜上低皮克級的蛋白條帶
? 長信號(hào)持續(xù)時(shí)間— 在條件優(yōu)化情況下,經(jīng)底物孵育的印跡條帶能夠持續(xù)輸出6至8小時(shí)的可檢測光信號(hào)
? 穩(wěn)定試劑— 工作液在24小時(shí)內(nèi)保持穩(wěn)定;試劑盒在室溫下可穩(wěn)定放置長達(dá)1年
? 價(jià)格經(jīng)濟(jì)— 針對稀釋的抗體濃度條件進(jìn)行了優(yōu)化:
? 0.2至 1.0 μg/mL一抗(以1 μg/mL儲(chǔ)存液稀釋1:1,000至1:5,000倍)
? 10至 50 ng/mL二抗(以1 μg/mL儲(chǔ)存液稀釋1:20,000至1:100,000倍)
? 注:優(yōu)化抗原和抗體的濃度。必須使用建議的抗體稀釋度,以保證陽性結(jié)果。有關(guān)建議的稀釋度范圍請參考其他所需材料。
4) 將印跡膜在West Pico ECL底物工作液中孵育5分鐘。
?2) 將膜從封閉液中取出,與一抗工作液在溫室孵育1小時(shí),同時(shí)振蕩;或在28℃孵育過夜,不振蕩。
注:孵育前,膜在洗滌緩沖液中的短暫淋洗會(huì)提高洗滌效率。
請注意:使用在前文建議的HRP標(biāo)記二抗稀釋度是非常重要的。
?4) 將HRP標(biāo)記的二抗工作液與膜在溫室孵育1小時(shí),同時(shí)振蕩。
?5) 重復(fù)步驟3,以除去未結(jié)合的HRP標(biāo)記二抗。注:膜與HRP標(biāo)記二抗孵育后必須進(jìn)行徹底洗滌。
??6) 將A溶液與B液等比例混合,制備成工作液。每cm2膜使用0.01~0.1ml工作液。工作液可以在溫室下穩(wěn)定8小時(shí)。注:日光或任何其他強(qiáng)光下可能損害工作液,為獲得最佳結(jié)果,將此工作液保存在琥珀色瓶中,并避免任何強(qiáng)光長期照射,短時(shí)間實(shí)驗(yàn)室常規(guī)照明不會(huì)損害該工作液。
8) 從工作液中取出印記膜,并置于一個(gè)塑料片或清潔的塑料紙(膜)中,用一張吸水紙吸除多余的液體,并從印記和塑料紙之間小心地壓出氣泡。
?9) 將包在塑料紙(膜)中的印記膜置于膠片暗盒中,蛋白質(zhì)面朝上,除適用于膠片曝光的燈(如紅色安全燈)之外,關(guān)閉所有的燈。
注;膠片必須在曝光期間保持干燥,為獲得最佳效果,才去一下措施:
*?? 切莫將印記膜置于已顯影的膠片上,因?yàn)槟z片上的化學(xué)物質(zhì)會(huì)減弱信號(hào)。
?? ?警告:膠片與膜之間的任何移動(dòng)可能在膠片上造成人為的非特異信號(hào)。
?11) 使用合適的顯影劑和定影劑對膠片進(jìn)行顯影。如果信號(hào)太強(qiáng),則縮短曝光時(shí)間或?qū)⒂∮浤みM(jìn)行剝離并降低抗體濃度重新檢測。
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