Annexin V-Super Fluor 647/PI?細胞凋亡檢測試劑盒
? ? ? ? ? ? ? ???圖1.?細胞凋亡過程中磷脂酰絲氨酸（PS）外翻示意圖
微量移液器；PBS；?不含EDTA的胰酶消化液；?低速離心機；?流式細胞儀
1)??????所有產(chǎn)品僅限用于研發(fā)，必須生物技術(shù)人員操作同時佩戴口罩/手套/實驗服并遵守生物實驗室安全操作規(guī)程！
2)???????微量試劑需離心數(shù)秒將試劑收集至管底后再開蓋取用。
3)???????Propidium Iodide（PI）有毒，操作時要帶手套，使用時避免與皮膚，眼睛和黏膜接觸。
4)???????Annexin V-Super Fluor 647中含有劇毒成分疊氮化鈉（NaN3）,?操作時要帶手套，使用時避免與皮膚，眼睛和黏膜接觸。
5)???????本試劑盒用于檢測活細胞，流式細胞儀檢測時，細胞數(shù)量1x105~1x106。
6)???????染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。
8)???????消化貼壁細胞殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-Super Fluor 647，最終導(dǎo)致染色失敗。
9)???????細胞固定后可能導(dǎo)致熒光的淬滅，請不要固定樣品。
1)???????收集細胞至離心管中1000-2000rpm離心5min，小心去除上清。
2)???????用1ml 4℃預(yù)冷PBS輕輕重懸細胞并計數(shù)，1000-2000rpm離心5min，小心吸除上清。
3)???????再加入1ml 4℃預(yù)冷的PBS重懸細胞，1000-2000rpm離心5min，小心吸除上清。
1）吸出細胞培養(yǎng)液至離心管中，PBS洗滌貼壁細胞一次，加入適量不含EDTA的胰酶細胞消化液消化細胞。
2）室溫孵育至輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，吸除胰酶細胞消化液。需避免胰酶的過度消化。
3）加入步驟i中收集的細胞培養(yǎng)液，稍混勻，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，1000-2000rpm離心5min，小心吸除上清。
4）用1ml 4℃預(yù)冷PBS輕輕重懸細胞并計數(shù)，1000-2000rpm離心5min，小心吸除上清。
5）再加入1ml 4℃預(yù)冷的PBS重懸細胞，1000-2000rpm離心5min，小心吸除上清。
2.??????用去離子水按1：4稀釋Binding Buffer（4ml Binding Buffer+12ml去離子水）；
3.??????用250ul結(jié)合緩沖液重新懸浮細胞，調(diào)節(jié)其濃度為1×106/ml；
4.??????取100ul的細胞懸液于5 ml流式管中，加入Annexin V- Super Fluor 647，輕輕混勻；
6.??????上機前5min加入10?uL碘化丙啶溶液，輕輕混勻；
7.??????上機前在反應(yīng)管中補加400ml PBS重懸細胞，?避光保存，?隨即進行流式細胞儀（FACS）檢測，?Annexin V- Alexa Fluor 647和PI均為紅色熒光。
圖2.?流式細胞儀檢測早期凋亡細胞。在雙變量流式細胞儀的散點圖上，左下象限顯示活細胞，右下象限為早期凋亡細胞，右上象限是凋亡晚期細胞和壞死細胞。
1) 本公司所有產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員用于生命科學(xué)研究，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅！
2)?本公司所有產(chǎn)品必須由合格專業(yè)技術(shù)人員操作同時佩戴口罩/手套/實驗服并遵守生物實驗室安全操作規(guī)程！
