TRITC Phalloidin標(biāo)記鬼筆環(huán)肽
Actin-Tracker Red-Rhodamine (微絲紅色熒光探針)?
2)?工作液的配置:吸取1 μL以上TRITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽母液至1 mL PBS(含1%BSA)緩沖液中即可得到1×工作液。
【注】:不同的細(xì)胞染色情況不同,相應(yīng)TRITC鬼筆環(huán)肽使用量也需根據(jù)不同情況而定。推薦工作濃度為:80~200 nM。工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。
1)細(xì)胞爬片生長(zhǎng)>24h,使其密度達(dá)到50~60%匯合度。
2)吸掉培養(yǎng)液,37℃預(yù)熱的1×PBS(pH 7.4)清洗細(xì)胞2次。
3)使用溶于PBS的4%甲醛溶液進(jìn)行細(xì)胞固定,室溫固定10~30min。
注意:避免固定劑中含有甲醇成分,因?yàn)榧状荚诠潭ㄟ^(guò)程中可能破壞肌動(dòng)蛋白。
4)室溫條件下,用PBS清洗細(xì)胞2~3次,每次10min。
5)室溫條件下,用丙酮(≤-20℃)脫水或者用0.5% Triton X-100溶液透化處理5min。
6)室溫條件下,用PBS清洗細(xì)胞2~3次,每次10min。
7)取100μL/孔(96孔板)配制好的?TRITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽工作液,覆蓋住蓋玻片上的細(xì)胞,室溫避光孵育30min(通常情況下,4℃~37℃孵育皆可)。
9)使用100 μL/孔(96孔板)即用型DAPI溶液(濃度:100 nM)對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染,約30s。
2)???1×PBS緩沖液, pH 7.4,?細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)別?
4)???丙酮或透化液0.5% Triton X-100(溶于PBS緩沖液)
5)???Fluoromount-GTM?水溶性封片劑(不含DAPI) ,DAPI?
6)???DAPI Fluoromount-GTM?水溶性封片劑(含DAPI)
7)???BSA,標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別?
10)?組裝有FITC激發(fā)/發(fā)射濾片,以及DAPI激發(fā)/發(fā)射濾片的熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡。
2.???????鬼筆環(huán)肽具有毒性,需小心操作。
3.???????本產(chǎn)品為凍干粉形式,微量不易觀察?使用前瞬時(shí)離心,加溶劑溶解后使用,?溶解后接近無(wú)色。
4.???????產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員用于生命科學(xué)研究,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅。
5.???????產(chǎn)品必須由合格專業(yè)技術(shù)人員操作同時(shí)佩戴口罩/手套/實(shí)驗(yàn)服并遵守生物實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)程!