本品Super Green(可替代Sybr Green)是用 DMSO 溶解,因為 DMSO 溶點是 18.3℃,使用前請放置到室溫充分溶解。
1.? ??相對安全:盡管可以穿透細(xì)胞膜進入細(xì)胞內(nèi),屬于花菁染料,使用相對安全,富百科AMES實驗顯示在工作濃度(凝膠染色濃度)下沒有發(fā)現(xiàn)致突變性,可以代替致癌物溴化乙錠EB作為各種核酸電泳的染色劑。參考文獻:衛(wèi)生研究-2020-49(6)-938
2.??? 高靈敏:紫外凝膠透射儀下靈敏度高 EB 染色法 5-10 倍,可見光透射儀下的靈敏度比 EB 染色法高20~30 倍。
4.??? 操作簡單:無須脫色或沖洗,即可用紫外凝膠透射儀觀察或可見光透射儀觀察。
5.??? 適用范圍廣:可適用于多種電泳分析,如瓊脂糖凝膠電泳和 PAGE 凝膠電泳。
6.??? 使用方便:不影響其它修飾酶作用(如:Taq 酶、內(nèi)切酶、T4 連接酶、反轉(zhuǎn)錄酶等)。
1)?? 制膠時加入 Super Green I? 核酸染料。冷卻膠到 50℃左右,每 100ml 膠中加入1-3μl Sybr Green I 核酸染料(見圖 1)。
3)?? 用紫外凝膠透射儀或可見光透射儀觀測。藍光可透過玻璃, 觀測聚丙烯酰胺凝膠時,可直接將托有凝膠的玻璃平皿放入可見光透射儀內(nèi)觀測。
*注:此方法染色能準(zhǔn)確確定片段分子量且用量較少。1ml 染料可以做 1000 塊10 ml 膠,每塊膠點 50 個樣,可做 50000 次。
6)?? 上樣、電泳:按常規(guī)操作。用紫外凝膠透射儀或可見光透射儀觀測。藍光可透過玻璃, 觀測聚丙烯酰胺凝膠時,可直接將托有凝膠的玻璃平皿放入可見光透射儀內(nèi)觀測。
1)?? 按照常規(guī)方法進行制膠,其中不含任何染料。
2)?? 用 pH 7.0 - 8.5? 的緩沖液(如:TAE, TBE),按照 1﹕1000 的比例稀釋 Sybr Green I
5)?? 用紫外凝膠透射儀或可見光透射儀觀測。藍光可透過玻璃, 觀測聚丙烯酰胺凝膠時,可直接將托有凝膠的玻璃平皿放入可見光透射儀內(nèi)觀測。
*注:用泡染方法染色時,可以精確確定核酸片段分子量。但染料用量是三種方法中用量最大的。
1.??? Super Green核酸染料樣品點染方法中,電泳不要超過 2 小時,以免核酸染料從 DNA/RNA 上分離出來,產(chǎn)生彌散狀條帶。
2.??? 用點染方法染色時,條帶稍有滯后現(xiàn)象,如果需要確定片段精確分子量(和 Marker 對比),建議用膠染法和泡染法。
3.??? 常規(guī)用酒精沉淀核酸過程中,Super Green I? 核酸染料可以全部從核酸上去掉。
4.??? DNA電泳請選擇 SuperGreen I 染料,RNA 電泳請選擇Super Green II染料,兩種染料不通用。
5.??? Super Green I 核酸染料對玻璃和非聚丙烯材料具有一定親合力。建議在稀釋、貯存、染 色等使用過程中用聚丙烯類容器。
6.??? 可以加Orange Red 作為標(biāo)記. pH值在7.5-8.3之間,不要微波加熱,加入熱膠的溫度低于50度
注意事項:?所有產(chǎn)品僅限用于研發(fā),必須生物技術(shù)人員操作同時佩戴口罩/手套/實驗服并遵守生物實驗室安全操作規(guī)程!
????????? Super Green I? 核酸染料不同使用方法電泳圖譜:
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=1:10?incubate at RT for 3~5min then load 5,2,1uL per lane.? ? ? ? ? ? ?Fig4. Sybr Green II點染(RNA)
1) 本公司所有產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員用于生命科學(xué)研究,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅。
2)?本公司所有產(chǎn)品必須由合格專業(yè)技術(shù)人員操作同時佩戴口罩/手套/實驗服并遵守生物實驗室安全操作規(guī)程!