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Super Green I GelStain核酸染料(~Sybr Green)電泳級

Super Green I GelStain核酸染料(~Sybr Green)電泳級

Super Green I GelStain核酸染料本品Super Green(可替代Sybr Green)是用 DMSO 溶解,因為 DMSO 溶點是 18.3℃,使用前請放置到室溫充分溶解。Super Green I ?核酸染料特點:1.? ??相對安全:盡管可以穿透細(xì)胞膜進入細(xì)胞內(nèi),屬于花菁染料,使用相對安全,富百科AMES實驗顯示在工作濃度(凝膠染色濃度)下沒有發(fā)現(xiàn)致突變性,可以代替致癌物溴化乙錠EB作為各種核酸電泳的染色劑。參考文獻:衛(wèi)生研究-2020-49(6)-9382.??? 高靈敏:紫外凝膠透射儀下靈敏度高 EB 染色法 5-10 倍,可見光透射儀下的靈敏度比 EB 染色法高20~30 倍。3.??...

Super Green I GelStain核酸染料

本品Super Green(可替代Sybr Green)是用 DMSO 溶解,因為 DMSO 溶點是 18.3℃,使用前請放置到室溫充分溶解。

Super Green I ?核酸染料特點:

1.? ??相對安全:盡管可以穿透細(xì)胞膜進入細(xì)胞內(nèi),屬于花菁染料,使用相對安全,富百科AMES實驗顯示在工作濃度(凝膠染色濃度)下沒有發(fā)現(xiàn)致突變性,可以代替致癌物溴化乙錠EB作為各種核酸電泳的染色劑。參考文獻:衛(wèi)生研究-2020-49(6)-938

2.??? 高靈敏:紫外凝膠透射儀下靈敏度高 EB 染色法 5-10 倍,可見光透射儀下的靈敏度比 EB 染色法高20~30 倍。

3.??? 信噪比高:樣品熒光信號強,背景信號低。

4.??? 操作簡單:無須脫色或沖洗,即可用紫外凝膠透射儀觀察或可見光透射儀觀察。

5.??? 適用范圍廣:可適用于多種電泳分析,如瓊脂糖凝膠電泳和 PAGE 凝膠電泳。

6.??? 使用方便:不影響其它修飾酶作用(如:Taq 酶、內(nèi)切酶、T4 連接酶、反轉(zhuǎn)錄酶等)。

Super Green I ?核酸染料使用方法:

1.膠染法(用法同EB)(推薦方法,見圖1)

1)?? 制膠時加入 Super Green I? 核酸染料。冷卻膠到 50℃左右,每 100ml 膠中加入1-3μl Sybr Green I 核酸染料(見圖 1)。

2)?? 按照常規(guī)方法進行電泳即可。

3)?? 用紫外凝膠透射儀或可見光透射儀觀測。藍光可透過玻璃, 觀測聚丙烯酰胺凝膠時,可直接將托有凝膠的玻璃平皿放入可見光透射儀內(nèi)觀測。

*注:此方法染色能準(zhǔn)確確定片段分子量且用量較少。1ml 染料可以做 1000 塊10 ml 膠,每塊膠點 50 個樣,可做 50000 次。

2.點染法(見圖3)?

1)?? 該方法適于瓊脂糖凝膠電泳和PAGE凝膠電泳。

2)?? 工作液的配制:用電泳緩沖液將10000×的Super Green I 稀釋100倍,即為Super Green I 工作液。Super Green I 工作液可以置2~8℃保存一個月以上, 濃縮液在-20℃保存半年。

3)?? 制膠:按常規(guī)方法制膠,不含任何染料。

4)?? 樣品染色:向分析樣品中加入Super Green I工作液和載樣緩沖液,室溫放置10分鐘,使Super Green I與樣品中DNA充分結(jié)合。Super Green I 工作液加入量為總上樣量的1/5~1/10。

5)?? DNA Marker染色:將5μL DNA Marker、5μL DNA Marker稀釋液和1μLSuper Green I 工作液混勻,室溫放置5分鐘,使Super Green I 與DNA充分結(jié)合。

6)?? 上樣、電泳:按常規(guī)操作。用紫外凝膠透射儀或可見光透射儀觀測。藍光可透過玻璃, 觀測聚丙烯酰胺凝膠時,可直接將托有凝膠的玻璃平皿放入可見光透射儀內(nèi)觀測。

*注:用點染法染色時,靈敏度最高,染料用量最少。通常點一個樣加入 1μL 即 可,可以使用 10000 次, 但大片段稍有滯后現(xiàn)象,如果需要更準(zhǔn)確確定分子量(與Marker 對比),建議使用膠染法。

3.泡染法

1)?? 按照常規(guī)方法進行制膠,其中不含任何染料。

2)?? 用 pH 7.0 - 8.5? 的緩沖液(如:TAE, TBE),按照 1﹕1000 的比例稀釋 Sybr Green I

3)?? 核酸染料,混勻,制成染色溶液。

4)?? 將染色溶液倒入合適的聚丙烯容器中,放入凝膠,用鋁箔等蓋住容器使染料避光。 室溫振蕩染色 10-30 分鐘,染色時間因凝膠濃度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝膠直 接在玻璃平皿上染色,將配好的稀釋溶液輕輕地倒在膠板上,讓稀釋液均勻地覆 蓋整個膠板,并染色 30 分鐘。玻璃平皿必須預(yù)先經(jīng)過硅烷化溶液處理(避免染料 吸附在玻璃表面上)。

5)?? 用紫外凝膠透射儀或可見光透射儀觀測。藍光可透過玻璃, 觀測聚丙烯酰胺凝膠時,可直接將托有凝膠的玻璃平皿放入可見光透射儀內(nèi)觀測。

*注:用泡染方法染色時,可以精確確定核酸片段分子量。但染料用量是三種方法中用量最大的。

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幾種染色方法特點比較:

??????????? 染色方法??????????? ? 特點

靈敏度

染料用量

確定片段分子量精

膠染法

較高

較少

較高

點染法

很高

最少

大片段稍有滯后

泡染法

較高

最多

最高

點染+染法

最高

較多

大片段稍有滯后

?

Super Green I? 核酸染料使用注意事項:

1.??? Super Green核酸染料樣品點染方法中,電泳不要超過 2 小時,以免核酸染料從 DNA/RNA 上分離出來,產(chǎn)生彌散狀條帶。

2.??? 用點染方法染色時,條帶稍有滯后現(xiàn)象,如果需要確定片段精確分子量(和 Marker 對比),建議用膠染法和泡染法。

3.??? 常規(guī)用酒精沉淀核酸過程中,Super Green I? 核酸染料可以全部從核酸上去掉。

4.??? DNA電泳請選擇 SuperGreen I 染料,RNA 電泳請選擇Super Green II染料,兩種染料不通用。

5.??? Super Green I 核酸染料對玻璃和非聚丙烯材料具有一定親合力。建議在稀釋、貯存、染 色等使用過程中用聚丙烯類容器。

6.??? 可以加Orange Red 作為標(biāo)記. pH值在7.5-8.3之間,不要微波加熱,加入熱膠的溫度低于50度

注意事項?所有產(chǎn)品僅限用于研發(fā),必須生物技術(shù)人員操作同時佩戴口罩/手套/實驗服并遵守生物實驗室安全操作規(guī)程!

????????? Super Green I? 核酸染料不同使用方法電泳圖譜:

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? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?EB? ???Super Green I DNA Stain? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? EB ????Super Green I

? Fig.1膠染法Fig.1 DNA marker 2000 10, 5, 2.5 per lane? ? ? ? ? ? ?Fig.2膠染+點染 Fig.2 DNA Marker 2000 incubate at RT for 3~5min

? ??????????sybrgreen-3.jpg? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?sybrgreen-4.jpg

? ? ? ? ? ? ? ? ? EB??? Super Green I DNA Stain? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? EB????? Super Green II RNA Stain

?Fig3. 點染法Fig.3 Volume ration of Dye/DNA marker 2000? ? ? ? ? ? ? ?Fig.4 Incubate at RT for 3~5min then load 0.5,1,1ug??per?lane

=1:10?incubate at RT for 3~5min then load 5,2,1uL per lane.? ? ? ? ? ? ?Fig4. Sybr Green II點染(RNA)

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