Super Fluor? 488，555, 647, 680, 750活化酯標(biāo)記抗體
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表?Super Fluor 488，555, 647, 680, 750活化酯的性質(zhì)參數(shù)
2. Super Fluor 標(biāo)記抗體的參考方案：
1)?蛋白溶解：用0.1 M NaHCO3溶解至終濃度為2mg/mL
2）染料溶解：活化Super Flour SE染料固體粉末從冰箱放入干燥器中慢慢升至常溫后，用無水DMSO(推薦使用SigmaAldrich貨號276855)將染料配置濃度為1 mg/mL。
4）純化：用透析法或者葡聚糖Sephadex純化產(chǎn)品后，產(chǎn)品冷凍干燥成粉末或在0.01 M PBS/2mM疊氮化鈉溶液中，-20℃避光儲存。
對于IgG?等大多數(shù)抗體來說，摩爾吸光系數(shù)為203000，F/P值在4～9?之間是最合適。
Super Flour 488標(biāo)記蛋白F/P值計算：
1）用PBS?精確倍數(shù)稀釋定量的少許純化過的偶聯(lián)蛋白，在1cm比色皿中測定280nm和494nm的光吸收；
2）計算樣品中的蛋白濃度：蛋白摩爾濃度=(A280-(A494×0.11))×稀釋倍數(shù)/203000
3）計算標(biāo)記比例：每摩爾蛋白結(jié)合的染料摩爾數(shù)=A494×稀釋倍數(shù)/(71000×蛋白摩爾濃度)
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