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SulfoCy5 SE

SulfoCy5 SESulfoCy和LipoCy為北京富百科生物技術(shù)有限公司注冊(cè)商標(biāo)，未經(jīng)授權(quán)嚴(yán)禁使用！水溶性的SulfoCy5 SE=Cy5 NHS=Cy5琥珀酰亞胺酯 (琥珀酰亞胺酯SE(Succinimidyl esters) = N-羥基琥珀酰亞胺NHS(N-Hydroxy succinimide)菁染料是性能優(yōu)良的熒光標(biāo)記染料，摩爾吸光系數(shù)在熒光染料中是最高的，其琥珀酰亞胺酯是最常用的脂肪氨基標(biāo)記試劑，廣泛用于蛋白、抗體、核酸及其他生物分子的標(biāo)記和檢測。通過改變次甲基鏈的長度,?可改變其熒光發(fā)射波長，每增加一個(gè)雙鍵，按照Huoffman規(guī)則正好紅移約100nm。菁染料Cy3和Cy5已成為基因芯片的首選熒...

詳細(xì)信息

SulfoCy5 SE

SulfoCy和LipoCy為北京富百科生物技術(shù)有限公司注冊(cè)商標(biāo)，未經(jīng)授權(quán)嚴(yán)禁使用！

水溶性的SulfoCy5 SE=Cy5 NHS=Cy5琥珀酰亞胺酯 (琥珀酰亞胺酯SE(Succinimidyl esters) = N-羥基琥珀酰亞胺NHS(N-Hydroxy succinimide)

菁染料是性能優(yōu)良的熒光標(biāo)記染料，摩爾吸光系數(shù)在熒光染料中是最高的，其琥珀酰亞胺酯是最常用的脂肪氨基標(biāo)記試劑，廣泛用于蛋白、抗體、核酸及其他生物分子的標(biāo)記和檢測。通過改變次甲基鏈的長度,?可改變其熒光發(fā)射波長，每增加一個(gè)雙鍵，按照Huoffman規(guī)則正好紅移約100nm。

菁染料Cy3和Cy5已成為基因芯片的首選熒光標(biāo)記物;另外,Cy5, Cy5.5和Cy7的吸收在近紅外區(qū)背景非常低，是熒光強(qiáng)度最高、最穩(wěn)定的長波長染料。特別適合于活體小動(dòng)物體內(nèi)成像代替放射性元素。

2.?菁染料琥珀酰亞胺酯（SulfoCy NHS）的標(biāo)記

菁染料和生物分子的比例F/P=4～12之間熒光強(qiáng)度最高，F/P值過高熒光探針會(huì)自我淬滅并影響生物分子的生物活性，標(biāo)記生物分子最好是用單琥珀酰亞胺酯，但是用雙修飾的CyDye NHS并沒有發(fā)現(xiàn)交聯(lián)。CyDye NHS標(biāo)記抗體在pH (8.5～9.4)時(shí)10分鐘F/P可達(dá)5～6，而在pH 7.0幾乎不反應(yīng)。我們用不同比例的Cy3標(biāo)記anti-glutathione-S-transferase (GST)多克隆抗體發(fā)現(xiàn)用1:1, 5:1, 10:1?和20:1標(biāo)記時(shí)得到的F/P值分別是0.28:1, 1.16:1, 2.3:1?和4.6:1。

3.?操作步驟

3.1?水溶性SulfoCy5 NHS標(biāo)記(D-ser²)-leucine-enkephalin?

1.????Cy5 NHS 1.0 mg?溶解于400 μL 無水DMSO(無水DMSO推薦使用SigmaAldrich貨號(hào)276855)后，加入到1mL?的玻璃瓶中盛有(D-ser²)-leucine-enkephalin acetate (YSGFLT, 0.75 mg)?的400 μL DMSO溶液。（Dye?和peptide?投料比是1:1）

2.????然后加入15 μL三乙胺，常溫避光攪拌反應(yīng)混合物過夜。

3.????用HPLC純化蛋白，使用蛋白C18柱子(25 cm×10 mm)，每次上樣注入2×400 μL，30分鐘梯度洗脫從0.1% TFA水溶液到MeCN∶H₂O（0.1% TFA）=70∶30，流速4mL /min。（對(duì)不同的蛋白選擇不同的合適HPLC梯度流動(dòng)相）

4.????收集適當(dāng)?shù)纳珟Х澹瑯?biāo)記多肽的保留時(shí)間比未標(biāo)記的多肽長。

5.????產(chǎn)品冷凍干燥成粉末或在水溶液中，-20℃避光儲(chǔ)存；必要時(shí)可用質(zhì)譜表征。

6．CyDye標(biāo)記的蛋白穩(wěn)定性取決于蛋白本身。例如標(biāo)記的IgG在4?℃可避光保存2月；更長期的保存需加入等體積的甘油-20?℃避光保存。

F/P計(jì)算：

SulfoCy5?在650 nm?的摩爾吸光系數(shù)為250 000 M^-1cm^-1，所用蛋白在280 nm處的摩爾吸光系數(shù)為170 000 M^-1cm^-1；Cy5在280nm處的吸收是650nm處的5%。按以下公式計(jì)算F/P值。

?[Cy5 dye] = (A₆₅₀)/250 000

?[peptide] =[A₂₈₀-(0.05×A₆₅₀)]/170 000

F/P?_final= [dye]/[peptide]= {0.68×A₆₅₀}/ {A₂₈₀- (0.05×A₆₅₀)}

特別提醒：

1) 本公司所有產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員用于生命科學(xué)研究，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅。

2)?本公司所有產(chǎn)品必須由合格專業(yè)技術(shù)人員操作同時(shí)佩戴口罩/手套/實(shí)驗(yàn)服并遵守生物實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)程！

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