本試劑盒本底低，靈敏度高，線性范圍寬，使用方便。本試劑盒可以測定1000個樣品1000T(96?孔板)。
注意事項：?本公司所有產(chǎn)品僅限用于研發(fā)，操作時必須戴口罩/手套/實驗服和其它生化實驗室防護措施。
1.??????探針裝載后，一定要洗凈殘余的未進入細胞內(nèi)的探針，否則會導致背景較高。
4.??????活性氧陽性對照(Rosup)?僅僅用于作為陽性對照的樣品，并不是在每個樣品中都需加入活性氧陽性對照。
5.??????探針裝載完畢并洗凈殘余探針后，可以進行激發(fā)波長的掃描和發(fā)射波長的掃描，以確認探針的裝載情況是否良好。DCF的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜請參考上圖。
6.??????盡量縮短探針裝載后到測定所用的時間（刺激時間除外），以減少各種可能的誤差。
7.? ? ??本公司所有產(chǎn)品僅限用于研發(fā)，操作時必須戴口罩/手套/實驗服和其它生化實驗室防護措施。
8.??????定量的話要作標準曲線吧。先做一個不同濃度H2O2氧化DCFA熒光值，做一條標準曲線，X軸為H2O2濃度，y軸是熒光值，得出一個方程，在看你樣品的熒光值即Y值是多少，對應的X值就是。
a)?細胞準備：檢測前一天進行細胞鋪板，確保檢測時細胞數(shù)量小于5×105/ml。
b)?藥物誘導：去除細胞培養(yǎng)液，加入無血清培養(yǎng)基稀釋的藥物處理，于37℃細胞培養(yǎng)箱內(nèi)避光孵育，實際誘導時間由藥物特性和細胞類型決定。
d) ROS?探針準備：探針裝載前按照1:1000?用無血清培養(yǎng)液稀釋DCFH-DA，使其終濃度為10 μM。
f)?細胞清洗：用無血清培養(yǎng)液洗滌細胞1～2?次，以充分去除未進入細胞內(nèi)的DCFH-DA。
a)?細胞準備：按照標準方法培養(yǎng)細胞，必須保證檢測用細胞狀態(tài)。按照適當方法，清洗并收集足量的細胞。
b)?藥物誘導：將收集好的細胞懸浮于適量稀釋好的藥物，于37℃細胞培養(yǎng)箱內(nèi)避光孵育，實際誘導時間由藥物特性和細胞類型決定。
d) ROS?探針準備：探針裝載前，按照1:1000?用無血清培養(yǎng)液稀釋DCFH-DA，使其終濃度為10 μM。
e)?探針裝載：除去細胞內(nèi)藥物，離心收集細胞，加入稀釋好的探針，使其細胞密度為1×106?～?2×107。
注意：細胞密度需根據(jù)后續(xù)的檢測體系，檢測方法，以及檢測總量來進行調(diào)整。例如：對于流式分析，單管檢測內(nèi)細胞數(shù)目不少于104，也不可多于106。
f)?細胞清洗：用無血清細胞培養(yǎng)液洗滌細胞1-2?次，以充分去除未進入細胞內(nèi)的DCFH-DA。
a)?對貼壁生長細胞或活組織，可直接在熒光顯微鏡下觀察；對懸浮生長細胞，取25-50 μL?細胞懸液滴到一張顯微載玻片上，再蓋上一張蓋玻片。
b)?熒光顯微鏡下，選用FITC?濾光片觀察熒光，去除背景觀察熒光的變化。
a)?對貼壁生長細胞，用胰酶消化制備成單細胞懸液；對懸浮生長細胞，直接收集細胞。用0.5-1 mL PBS?重懸細胞(0.5～1 x 105/ml)。
b)?選擇流式細胞儀FL1?或BL1?通道，488nm?激發(fā)，測定530nm?的發(fā)射，細胞應可分成兩個亞群：ROS?陰性細胞僅有很低的熒光強度，ROS?陽性細胞有較強的綠色熒光。
?使用活性氧檢測試劑盒(Reactive oxygen species assay kit)顯示CHO細胞內(nèi)活性氧熒光。
左圖：CHO細胞用試劑盒配備的活性氧陽性對照處理；右圖：正常CHO細胞。綠色熒光表明細胞活性氧急劇增加，并能顯示其定位。
1) 本公司所有產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員用于生命科學研究，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅!
2)?本公司所有產(chǎn)品必須由合格專業(yè)技術(shù)人員操作同時佩戴口罩/手套/實驗服并遵守生物實驗室安全操作規(guī)程！
