本試劑盒提供了CCCP作為誘導(dǎo)線(xiàn)粒體膜電位下降的陽(yáng)性對(duì)照。
對(duì)于六孔板中的樣品，本試劑盒共可以檢測(cè)100個(gè)樣品；對(duì)于12孔中的樣品，本試劑盒共可以檢測(cè)200個(gè)樣品。
2.??? 陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置：
取10～60萬(wàn)細(xì)胞，重懸于0.5mL細(xì)胞培養(yǎng)液中，細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
加入0.5mL JC-1染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中37℃孵育20分鐘。
在孵育期間，按照每1mL JC-1染色緩沖液（5×）加入4mL蒸餾水的比例，配制適量的JC-1染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
37℃孵育結(jié)束后，600g 4℃離心3～4分鐘，沉淀細(xì)胞。棄上清，注意盡量不要吸除細(xì)胞。
再用適量JC-1染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀(guān)察，也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
注意：對(duì)于貼壁細(xì)胞，如果希望采用熒光分光光度計(jì)或流式細(xì)胞儀檢測(cè)，可以先收集細(xì)胞，重懸后參考懸浮細(xì)胞的檢測(cè)方法。
加入1mL JC-1染色工作液，充分混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中37℃孵育20分鐘。
在孵育期間，按照每1mL JC-1染色緩沖液（5×）加入4mL蒸餾水的比例，配制適量的JC-1染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
37℃孵育結(jié)束后， 吸除上清，用JC-1染色緩沖液（1×）洗滌2次。
加入2mL細(xì)胞培養(yǎng)液，培養(yǎng)液中可以含有血清和酚紅。
把配制好的JC-1染色工作液再用JC-1染色緩沖液（1×）稀釋5倍。
0.9mL 5倍稀釋的JC-1染色工作液中加入0.1mL總蛋白量為10～100μg純化的線(xiàn)粒體。
用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀(guān)察：方法同下面的步驟6。
6.??? 熒光觀(guān)測(cè)和結(jié)果分析
1.? JC-1（200×）在4℃、冰浴等較低溫度情況下會(huì)凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi)，可以20～25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
3.? 裝載完JC-1后用JC-1染色緩沖液（1×）洗滌時(shí)，使JC-1染色緩沖液（1×）保持4℃左右，此時(shí)的洗滌效果較好。
4.? JC-1探針裝載完并洗滌后盡量在30分鐘內(nèi)完成后續(xù)檢測(cè)。在檢測(cè)前需冰浴保存。
5.? 請(qǐng)勿把JC-1染色緩沖液（5×）全部配制成JC-1染色緩沖液（1×），本試劑盒使用過(guò)程中需直接使用JC-1染色緩沖液（5×）。
6.? 如果發(fā)現(xiàn)JC-1染色緩沖液（5×）中有沉淀，必須全部溶解后才能使用，為促進(jìn)溶解可以在37℃加熱。
7.? CCCP為線(xiàn)粒體電子傳遞鏈抑制劑，有毒，請(qǐng)注意小心防護(hù)。
8.?本公司所有產(chǎn)品僅限用于研發(fā)，操作時(shí)必須戴口罩/手套/實(shí)驗(yàn)服和其它生化實(shí)驗(yàn)室防護(hù)措施。
