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鈣熒光探針bioFluo-3, AM

鈣熒光探針bioFluo-3, AM

bioFluo-3, AMbioFluo?為北京富百科生物技術(shù)有限公司注冊商標，未經(jīng)授權(quán)嚴禁使用！CAS#：121714-22-5中文名：鈣熒光探針bioFluo-3, AM也稱之為Fluo-3, AM英文名：1-[2-Amino-5-(2,7-dichloro-6-hydroxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, pentaacetoxymethyl ester結(jié)構(gòu)式：分子式：C51H50Cl2N2O23?分子量：1129.85儲存條件：-20℃干燥避光保存，有效期一年性質(zhì)：1. 外觀：紅色粉末2. 純度：≥90%（HPLC）3. 產(chǎn)品描述： 鈣指示劑是結(jié)合 Ca2+?后顯示熒光增強的分子。Fluo-3 ...


bioFluo-3, AM

bioFluo?為北京富百科生物技術(shù)有限公司注冊商標，未經(jīng)授權(quán)嚴禁使用！

CAS#：121714-22-5

中文名：鈣熒光探針bioFluo-3, AM也稱之為Fluo-3, AM

英文名：1-[2-Amino-5-(2,7-dichloro-6-hydroxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, pentaacetoxymethyl ester

結(jié)構(gòu)式：

fluo3am.jpg

分子式：C51H50Cl2N2O23?分子量：1129.85

儲存條件：-20℃干燥避光保存，有效期一年

性質(zhì)：

1. 外觀：紅色粉末

2. 純度：≥90%（HPLC）

3. 產(chǎn)品描述：

鈣指示劑是結(jié)合 Ca2+?后顯示熒光增強的分子。Fluo-3 應(yīng)用在流式細胞分析上，如涉及籠狀螯合劑光活化、第二信使和神經(jīng)遞質(zhì)的實驗以及基于細胞的藥理學(xué)篩選，用于 Ca2+?信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的空間動力學(xué)成像。Fluo-4 是 fluo-3 的類似物，其中兩個氯取代基被氟取代，導(dǎo)致在 488 nm 波長處的熒光激發(fā)增強，因此熒光信號水平更高。將溶解后的指示劑直接加入含有培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)皿中，即可向細胞加載 AM 酯形式的這類鈣離子指示劑。這些指示劑可用于熒光和共聚焦顯微鏡、流式細胞分析以及微孔板篩選應(yīng)用。

bioFluo-3, AM是最常用的檢測細胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光探針之一。它穿透細胞膜進入細胞后被細胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-3，從而被滯留在細胞內(nèi)，F(xiàn)luo-3若以游離配體形式存在時幾乎是非熒光性的，但是當它與細胞內(nèi)鈣離子結(jié)合后可以產(chǎn)生較強的熒光，最大激發(fā)波長為506nm，最大發(fā)射波長為526nm。實際檢測時推薦使用的激發(fā)波長為488nm左右，發(fā)射波長為525～530nm?？梢允褂眉す夤簿劢癸@微鏡或流式細胞儀檢測細胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。

4. 操作說明（for Human T cells）*
（1） 試劑
2 mM的bioFluo-3, AM/DMSO（將1mg Fluo-3, AM溶于442μL DMSO）
Pluronic F127
Hanks?balanced salt solution（HBSS）
HEPES buffer saline（10mM HEPES，1mM Na2HPO4，137mM NaCl，5mM KCl，1mM CaCl2，0.5mM MgCl2，5mM glucose，0.1% BSA，pH 7.4）
（2） 操作
①. 向bioFluo-3, AM/DMSO溶液中加入16.5mg Pluronic F127，Pluronic F127可以??? 防止Fluo-3, AM在HBSS中聚合并能幫助其進入細胞。
②. 用HBSS稀釋Fluo-3, AM溶液，制備4μM的Fluo-3, AM工作液。
③. 將Fluo-3, AM工作液加入細胞，在37℃培養(yǎng)20分鐘。
④. 加入5倍體積的含有1%胎牛血清的HBSS，再繼續(xù)培養(yǎng)40分鐘。
⑤. 用HEPES buffer saline洗滌細胞3次，然后用HEPES buffer saline使細胞重懸浮，制成1×105 cells/mL的溶液。
⑥. 37℃下培養(yǎng)10分鐘，然后用該細胞進行熒光鈣離子檢測。激發(fā)波長506nm，發(fā)射波長526nm。?
*標記的條件因細胞種類而異，在每次實驗前，請先確定最佳條件。以上方法僅供參考。


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