FITC

CAS#：3326-32-7

中文名：異硫氰酸熒光素

英文名：5-FITC；5-Flourescein iso-thiocyanate；FITC 'Isomer I' [5-FITC; fluorescein-5-isothiocyanate]

結(jié)構(gòu)式：

分子式：C21H11NO5S

分子量：389.38

性質(zhì)：

1. 外觀：黃色粉末

2. 純度：≥95% (HPLC)

3. 產(chǎn)品描述：

FITC能和各種抗體蛋白結(jié)合，結(jié)合后的抗體不喪失與一定抗原結(jié)合的特異性，并在堿性溶液中具有強(qiáng)烈的黃綠色熒光。通過在熒光顯微鏡下觀察或流式細(xì)胞儀分析可對(duì)相應(yīng)抗原進(jìn)行定性、定位或定量的檢測(cè)。用于醫(yī)學(xué)，農(nóng)學(xué)和畜牧等方面，可對(duì)由地細(xì)菌病毒和寄生蟲等所致疾病進(jìn)行快速診斷。

4. FITC標(biāo)記抗體流程：

（1）? 將待交聯(lián)的蛋白（濃度31mg/mL）對(duì)交聯(lián)反應(yīng)液透析三次4℃，至pH＝9.0。交聯(lián)反應(yīng)液配制方法：7.56g NaHCO₃，1.06g Na₂CO₃，7.36g NaCl，加水定容至1 L。

（2）? 將FITC溶于DMSO中，濃度為1mg/mL。每次交聯(lián)使用的FITC均應(yīng)新鮮配制，避光。

（3）? 按P:F（蛋白質(zhì):FITC）=1mg:150μg 的比例將FITC緩慢加入于抗體溶液中，邊加邊輕輕晃動(dòng)使其與抗體混合均勻，暗處4℃反應(yīng)8h。

（4）? 加入5mol/L的NH4Cl至終濃度50mmol/L，4℃終止反應(yīng)2h。

（5）? 將交聯(lián)物在PBS中透析四次以上，至透析液清亮。

（6）? 交聯(lián)物的鑒定

蛋白濃度(mg/mL) = [ A₂₈₀– 0.31×A₄₉₅ ] / 1.4

F/P比例: 3.1×A₄₉₅ / [A280 – 0.31×A₄₉₅ ]，該值應(yīng)介于2.5～6.5之間。

（7）? FITC交聯(lián)的蛋白應(yīng)置于pH 7.4的磷酸鹽緩沖液中，加入0.1% NaN3、1% BSA，4℃避光保存。

儲(chǔ)存條件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。

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