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BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白濃度測定試劑盒
1.??????規(guī)格：
編號 |
組分 |
產(chǎn)品編號/規(guī)格 |
儲存 |
||
500T |
2500T |
5000T |
|||
BCA-A |
100mL |
500mL |
2×500mL |
4℃ |
|
BCA-B |
3mL |
15mL |
2×15mL |
4℃ |
|
BCA-C |
蛋白標準品（BSA） |
2×1mL（5mg/mL） |
10×1mL（5mg/mL） |
20×1mL（5mg/mL） |
-20℃ |
BCA-D |
PBS?溶液 |
10mL |
50mL |
100mL |
4℃ |
2.?儲存/運輸：?冰袋運輸。試劑盒中A、B液室溫或4℃保存；蛋白標準品（BSA）置于-20℃保存，有效期12個月。
3.?產(chǎn)品描述：??
BCA（Bicinchoninic acid）法是目前應用比較廣泛的蛋白質(zhì)濃度測定方法?；陔p縮脲反應，即在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)將Cu2+還原成Cu+，產(chǎn)生一種紫藍色復合物，在562nm處有高的吸光值，該反應產(chǎn)物的量與蛋白質(zhì)濃度成正比。BCA蛋白濃度測定法實現(xiàn)了蛋白質(zhì)濃度測定的簡便、靈敏、快速和穩(wěn)定性。試劑盒中提供的蛋白標準品為用戶制作標準曲線提供了便利。該BCA蛋白濃度測定試劑盒可用于比色皿法檢測，也可用于微孔板法檢測。前者雖需較大量（100μL）的蛋白樣品，但由于其在檢測中使用蛋白樣品與BCA工作液的比率為1:20（v/v），從而降低干擾物質(zhì)帶來的影響。后者操作簡單方便，僅需少量（10-25μL）的蛋白樣品。不過，由于其在檢測中使用蛋白樣品與BCA工作液的比率為1:8（v/v），某種程度上限制干擾物質(zhì)的承受濃度以及降低最低檢測水平。
4.?產(chǎn)品特點
1）靈敏度高，最小檢測蛋白量可達0.2μg，檢測濃度下限達到10μg/mL(在20~1000μg/ml?濃度范圍內(nèi)有較好的線性關系）。
2）速度快，比一般的BCA蛋白濃度測定試劑盒顯色所用時間短。比傳統(tǒng)的Lowry法檢測速度約快4倍。
3）線性范圍廣，20-1000μg/mL濃度范圍內(nèi)有較好的線性范圍。
4)?不受大部分樣品中的化學物質(zhì)的影響, BCA法測定蛋白濃度的最大優(yōu)點是蛋白濃度的測定可以耐受高濃度的去垢劑,?可以兼容樣品中高達?5%的SDS; 5%的Triton X- 100; 5%的Tween 20, 60, 80。但受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保EDTA低于?10mM?，無EGTA?，二硫蘇糖醇低于?1mM; β-巰基乙醇低于?0.01%。詳情見7的附表1。
5) Bradford法與BCA法的對比
方法 |
Bradford法 |
BCA法 |
靈敏度 |
1~5?μg |
0.5~20?μg |
時間 |
5~15?min |
40~60?min |
波長 |
595?nm |
562?nm |
檢測不同類別蛋白質(zhì) |
變異系數(shù)較高 |
變異系數(shù)較低 |
吸光穩(wěn)定性 |
1?h內(nèi)穩(wěn)定 |
隨時間變化 |
5.?操作說明
將試劑A和試劑B按照體積比50:1比例混合配成BCA工作液。取50mL試劑A與1mL試劑B混合，配成51mL BCA工作液。兩者混合時會有沉淀形成，徹底混勻后沉淀消失。
1.?蛋白標準品配制：室溫完全溶解蛋白標準品， 取?20μl 5mg/ml BSA?蛋白標準溶液用?PBS?溶液稀釋至?100μl使其終濃度為?1.0 mg/ml。
2.?按照下表配制?BSA?標準測定溶液：
編號 |
0 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
1 mg/ml BSA??標準溶液?μL |
5 mg/ml BSA??標準溶液?μL |
||||||||
BSA?標準溶液?μl |
0 |
0.5 |
2.5 |
5.0 |
10 |
15 |
20 |
6 |
8 |
PBS??溶液?μl |
20 |
19.5 |
17.5 |
15 |
10 |
5 |
0 |
14 |
12 |
BSA?終濃度?μg/ml |
0 |
25 |
125 |
250 |
500 |
750 |
1000 |
1500 |
2000 |
總體積?μl |
20 μl |
||||||||
3.?將適當體積的待測樣品加入到微孔板中，并用?PBS?補足到?20 μl
4.?向微孔板中加入200μL BCA工作液混勻, 37 ℃放置30分鐘； 注：也可以室溫放置2小時,或?60 ℃放置30分鐘。BCA?法測定蛋白濃度時,顏色會隨著時間的延長不斷加深,并且顯色反應會因溫度升高而加快。如果濃度較低,?適合在較高溫度孵育,或適當延長孵育時間。
5.?測定?562 nm處的吸光值， 并記錄讀數(shù)； 以不含BSA的樣品的光吸收值作為空白對 照。
6.?以A562為縱坐標, BSA含量為橫坐標,?繪制標準曲線,?計算樣品中的蛋白濃度.?如果蛋白濃度不在標準曲線范圍內(nèi),?請稀釋樣品后重新測定。
1.?蛋白標準品配制：
室溫完全溶解蛋白標準品,?取150μL 5mg/ml BSA蛋白標準溶液,加入600μLPBS溶液稀釋至750μl，使其終濃度為?1.0 mg/ml。
2、按照下表配制?BSA?標準測定溶液：
編號 |
0 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
1 mg/ml BSA??標準溶液?μl |
5 mg/ml BSA??標準溶液?μl |
||||||||
BSA?標準溶液?μl |
0 |
2.5 |
12.5 |
25 |
50 |
75 |
100 |
30 |
40 |
PBS??溶液?μl |
100 |
97.5 |
87.5 |
75 |
50 |
25 |
0 |
70 |
60 |
BSA?終濃度?μg/ml |
0 |
25 |
125 |
250 |
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