吖啶橙AO/EB雙熒光染色試劑盒

吖啶橙(Acridine Orange),?屬于三環(huán)雜芳香燃料，可以標記DNA、RNA，屬于異染性熒光染料，AO常用于細胞內(nèi)DNA和RNA進行檢測。AO與核酸結(jié)合方式主要有：1、插入性結(jié)合，AO嵌入核酸雙鏈的堿基對之間，這種結(jié)合方式主要為AO與DNA的結(jié)合，其熒光發(fā)射峰為530nm，激發(fā)后呈綠色熒光，其熒光發(fā)射峰為640nm，激發(fā)后呈紅色熒光，少量結(jié)合會呈桔黃色或桔紅色熒光。因此，AO嵌合到雙鏈DNA分子中顯綠色，與DNA單鏈或RNA結(jié)合時發(fā)橙紅色熒光。Ethidium Bromide嵌合到雙鏈DNA或RNA的堿基對中，無堿基特異性，發(fā)紅色熒光。

吖啶橙能透過胞膜完整的細胞，嵌入細胞核DNA，與雙鏈DNA結(jié)合后發(fā)出綠色熒光，溴化乙錠(EB)僅能透過胞膜受損的細胞，嵌入核DNA，發(fā)橘紅色熒光。凋亡的細胞呈現(xiàn)為染色增強，熒光更為明亮，均勻的圓狀或固縮狀、團塊狀結(jié)構(gòu)。非凋亡細胞核呈現(xiàn)熒光深淺不一的結(jié)構(gòu)樣特征。二者很容易判別。在熒光顯微鏡下觀察，可見四種細胞形態(tài)：活細胞(VN)，核染色質(zhì)著綠色并呈正常結(jié)構(gòu)；早期凋亡細胞(VA)，核染色質(zhì)著綠色呈固縮狀或圓珠狀；晚期凋亡細胞(NVA)，核染色質(zhì)為橘紅色并呈固縮狀或圓珠狀；非凋亡的死亡細胞(NVN)，核染色質(zhì)著橘紅色并呈正常結(jié)構(gòu)。本產(chǎn)品所含穩(wěn)定劑不影響實驗效果。有效期：?4度密封避光12個月有效

吖啶橙(AO)-EB雙染色試劑盒使用方法：（僅供參考）
?使用前先根據(jù)用量，將AO溶液和EB溶液按1:1混合成工作液，先用現(xiàn)配。
??a)對于貼壁細胞或爬片，去掉培養(yǎng)基，用PBS洗兩遍去除殘余培養(yǎng)基和未貼壁細胞，加入新的PBS；如果需要觀察全部細胞特性，保留未貼壁細胞，可以直接在培養(yǎng)基中加入工作液。按照每毫升培養(yǎng)基或PBS中加入20ul工作液即可。室溫放置2-5min后于熒光顯微鏡下觀察。
??b)對于懸浮細胞，可直接加入工作液或離心收集細胞后在PBS中加入工作液。按照每毫升培養(yǎng)基或PBS中加入20ul工作液即可。室溫放置2-5min后于熒光顯微鏡下觀察。

染色結(jié)果：

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吖啶橙(AO)-EB雙染色試劑盒注意事項：

1.?用能通過活細胞膜與DNA結(jié)合后發(fā)藍色熒光的Hoechist 33342和只能通過死細胞與DNA結(jié)合后發(fā)紅色熒光的propidium iodide對細胞進行雙染的方法也比較常用。

2.?如有低溫離心機進行離心效果更佳。

3.?操作過程中應(yīng)注意減少染色溶液暴露于強光下的時間。

4. 含酚紅培養(yǎng)基對觀察有輕微影響。建議使用無酚紅培養(yǎng)基。

5.?染色液工作濃度和染色時間可根據(jù)具體實驗情況適當調(diào)整，以期達到佳效果。

6.?EB?和吖啶橙(Acridine Orange)有一定毒性，請小心操作。

特別提醒：

1) 本公司所有產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員用于生命科學(xué)研究，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅。

2)?本公司所有產(chǎn)品必須由合格專業(yè)技術(shù)人員操作同時佩戴口罩/手套/實驗服并遵守生物實驗室安全操作規(guī)程！