Hoechst 33258染色液
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中文名：二苯甲亞胺,?三氯化氫2'-(4-羥基苯基)-5-(4-甲基-1-哌嗪基)-2,5'-二-1H-苯并咪唑
英文名：2’-(4-Hydroxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5’-bi-1H-benzimidazole, trihydrochloride
別名：Hoechst 33258，bisBenzimide H 33258，HOE 33258bisBenzimide?H?33258或HOE?33258
結(jié)構(gòu)式：
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性質(zhì)：1.?外觀(guān)：黃色粉末??2.?純度：≥99%（HPLC）超純級(jí)；CAS#：23491-45-4； 分子式：C25H24N6O · 3HCl； 分子量：533.88
產(chǎn)品描述：
Hoechst染料是一類(lèi)在顯微觀(guān)察中標(biāo)記DNA的熒光染料。因?yàn)檫@類(lèi)熒光染料能標(biāo)記DNA，所以它們也經(jīng)常用于細(xì)胞核和線(xiàn)粒體的顯像觀(guān)察。這類(lèi)染料中兩個(gè)相關(guān)的染料Hoechst 33258和Hoechst 33342經(jīng)常使用。這兩種染料都在紫外光下350nm處被激發(fā)，都在461nm處最大發(fā)射光附近發(fā)射藍(lán)/青色熒光。Hoechst染料可以用于活細(xì)胞或者固定化細(xì)胞，并且經(jīng)常用來(lái)代替其它核酸染料如DAPI。這兩種染料關(guān)鍵的不同點(diǎn)在于，Hoechst 33342加有乙基，這使它具有更強(qiáng)的親脂性，因此能更好的透過(guò)完整的細(xì)胞膜。在一些實(shí)驗(yàn)中，Hoechst 33258的滲透性明顯比Hoechst 33342要弱些。這些染料也可以用來(lái)檢測(cè)樣品中的DNA含量，通過(guò)繪制發(fā)射光強(qiáng)度與DNA含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
Hoechst 33258是一種可透過(guò)細(xì)胞膜并對(duì)DNA染色的細(xì)胞核染色試劑，它在嵌入雙鏈DNA后釋放強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光。Hoechst 33258常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，染色后用熒光顯微鏡觀(guān)察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。Hoechst 33258-DNA的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為350 nm和460 nm。
使用方法：
1、對(duì)于固定的細(xì)胞或組織：
1.1 ??對(duì)于細(xì)胞或組織樣品，固定后，適當(dāng)洗滌去除固定劑。隨后如果需要進(jìn)行免疫熒光染色，則先進(jìn)行免疫熒光染色，染色完畢后再按后續(xù)步驟進(jìn)行Hoechst 33258染色。如果不需要進(jìn)行其它染色，則直接進(jìn)行后續(xù)的Hoechst 33258染色。
1.2 ?對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片，加入少量Hoechst 33258染色液，覆蓋住樣品即可。對(duì)于懸浮細(xì)胞，至少加入待染色樣品體積3倍的染色液，并混勻。室溫放置3-5分鐘。
1.3???吸除Hoechst 33258染色液，用TBST?、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。
1.4???直接在熒光顯微鏡下或封片后熒光顯微鏡下觀(guān)察。觀(guān)察細(xì)胞凋亡時(shí)，會(huì)看到凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染。
2、對(duì)于活細(xì)胞或組織：
2.1 ?加入適當(dāng)量Hoechst 33258染色液，必須充分覆蓋住待染色的樣品，通常對(duì)于六孔板一個(gè)孔需加入1ml染色液，對(duì)于96?孔板一個(gè)孔需加入100微升染色液。
2.2???在適宜于細(xì)胞培養(yǎng)的溫度培養(yǎng)20-30分鐘。棄染色液，用PBS或培養(yǎng)液洗滌2-3次即可進(jìn)行熒光檢測(cè)。
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，有效期一年。
注意事項(xiàng)：
1)Hoechst 33258對(duì)人體有一定刺激性，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。
2)熒光染料都存在淬滅的問(wèn)題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)。
3)為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。
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