PEI Transfection Reagent ?轉(zhuǎn)染試劑 (高效低毒)
產(chǎn)品簡介：
線性化聚乙烯亞胺?PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種高電荷陽離子聚合物，非常容易結(jié)合帶負(fù)電荷的核酸分子，形成復(fù)合物， 并使該復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞中。該轉(zhuǎn)染試劑是一種瞬時(shí)轉(zhuǎn)染試劑，細(xì)胞毒性低，轉(zhuǎn)染效率高，在 293?和?CHO?等細(xì)胞中基因表達(dá)效率較高。目前已經(jīng)驗(yàn)證線性?PEI?轉(zhuǎn)染試劑廣泛適用于多種細(xì)胞系包括 293、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2?和?Hela?細(xì)胞等。該試劑與含血清的培養(yǎng)基兼容，能高效的將核酸導(dǎo)入細(xì)胞。
產(chǎn)品儲(chǔ)存：?-20℃保存兩年。（4 °C保存有效期1年，不可重新凍存?。?/span>
使用方法：?DNA的轉(zhuǎn)染?以?6?孔板為例
1.?接種細(xì)胞：為了提高轉(zhuǎn)染效率，建議在轉(zhuǎn)染前一天接種細(xì)胞，以轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度在?70%~80%為宜。
2.?準(zhǔn)備?DNA-PEI?復(fù)合物：按照以下體系配制?DNA-PEI?核酸-轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物：
1）?對(duì)于每孔細(xì)胞，使用?100 μL?無血清培養(yǎng)基稀釋?2 μg?目的DNA?，充分混勻成?DNA?稀釋液。
【注】：無血清稀釋液建議采用?Opti-MEM?或ddH2O
2）?立刻向?100 μL?的?DNA?稀釋液中加入?5 μL?的PEI轉(zhuǎn)染試劑，旋渦?10?秒，充分混勻。
3）?在室溫下孵育?10~25 min，使得形成?DNA-PEI?陽離子核酸轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物。
3.?轉(zhuǎn)染細(xì)胞：
1）?在形成復(fù)合物過程中，移除細(xì)胞生長培養(yǎng)基，每孔中加入?2 mL?新鮮預(yù)熱的完全培養(yǎng)基。
2）?直接將?100 μL DNA-PEI?核酸-PEI?復(fù)合物加入細(xì)胞中，搖動(dòng)培養(yǎng)板，輕輕混勻。
3）37 ℃，5% CO2?培養(yǎng)箱培養(yǎng)，轉(zhuǎn)染后最快?7 h?即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。請(qǐng)自行確定適合檢測時(shí)間。
4.?穩(wěn)轉(zhuǎn)篩選（可選）
轉(zhuǎn)染?24 h?后，將細(xì)胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中（將細(xì)胞稀釋?10?倍以上），37 ℃，5% CO2?培養(yǎng)箱孵育過夜。第二天加入與轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的篩選藥物。約?1~2?周可篩選到耐藥性克隆，在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。
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不同細(xì)胞培養(yǎng)容器轉(zhuǎn)染用量（僅供參考）：
培養(yǎng)皿 |
表面積（cm2） |
DNA?的量（μg） |
轉(zhuǎn)染試劑的量（μL） |
稀釋液體積（μL） |
培養(yǎng)基總量 |
96?孔板 |
0.3 |
0.1 |
0.1 |
10 |
100 μL |
48?孔板 |
0.7 |
0.2 |
0.3 |
20 |
200 μL |
24?孔板 |
1.9 |
0.5 |
1 |
50 |
500 μL |
12?孔板 |
3.8 |
1 |
2 |
50 |
1mL |
6?孔板 |
10 |
2 |
4 |
100 |
2 mL |
25cm2?培養(yǎng)瓶 |
21 |
4 |
8 |
200 |
4 mL |
75cm2?培養(yǎng)瓶 |
58 |
10 |
20 |
500 |
10 mL |
?
注意事項(xiàng)
1）?配置好的?PEI?溶液從-20?oC?拿出融化后，可放在?4?oC?冰箱保存，絕不可重新凍存。
2）?對(duì)大多數(shù)細(xì)胞每1μg?DNA用3.0 μL?PEI?轉(zhuǎn)染試劑。也可以1μg DNA?使用?1.5~4?μL?PEI?轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。
3）?本公司所有產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員用于生命科學(xué)研究，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅。
4）?本公司所有產(chǎn)品必須由合格專業(yè)技術(shù)人員操作同時(shí)佩戴口罩/手套/實(shí)驗(yàn)服并遵守生物實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)程！
