CFDA SE細(xì)胞增殖與示蹤檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品說(shuō)明：

CFDA SE細(xì)胞增殖與示蹤檢測(cè)試劑盒(CFDA SE Cell Proliferation Assay and Tracking Kit)是基于一種新型熒光探針CFDA SE的用于細(xì)胞增殖檢測(cè)和細(xì)胞熒光示蹤的檢測(cè)試劑盒。CFDA SE目前被廣泛用于替代MTT法或[3H]-thymidine摻入等其它細(xì)胞增殖檢測(cè)方法。
??????基于CFDA SE熒光標(biāo)記的細(xì)胞增殖檢測(cè)和[3H]-thymidine摻入、BrdU標(biāo)記獲得的檢測(cè)結(jié)果完全一致，但同時(shí)可以提供更多的細(xì)胞增殖信息。使用CFDA SE檢測(cè)可以提供整個(gè)細(xì)胞群中有多少比例的細(xì)胞分裂了1次、2次或更多次數(shù)，同時(shí)如果和其它熒光探針聯(lián)用，可以獲取不同分裂次數(shù)細(xì)胞的其它相關(guān)信息。
??????CFDA-SE的全稱(chēng)為Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester，?CFDA?SE可以通透細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶(esterase)催化分解成CFSE，CFSE可以偶發(fā)性地(spontaneously)并不可逆地和細(xì)胞內(nèi)蛋白的Lysine殘基或其它氨基發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，并標(biāo)記這些蛋白。在加入熒光探針CFDA?SE后大約24小時(shí)，即可充分標(biāo)記細(xì)胞。被CFDA?SE標(biāo)記的非分裂細(xì)胞的熒光非常穩(wěn)定，穩(wěn)定標(biāo)記的時(shí)間可達(dá)數(shù)個(gè)月。CFDA?SE標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均一，比以前使用的其它細(xì)胞示蹤熒光探針例如PKH26的熒光更加均一，并且分裂后的子代細(xì)胞的熒光分配也更均勻。
?????由于CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均勻和穩(wěn)定，每分裂一次子代細(xì)胞的熒光會(huì)減弱一半，這樣通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)就可以檢測(cè)出沒(méi)有分裂的細(xì)胞，分裂一次的細(xì)胞(1/2的熒光強(qiáng)度)，分離兩次的細(xì)胞(1/4的熒光強(qiáng)度)，分裂三次的細(xì)胞(1/8的熒光強(qiáng)度)以及類(lèi)似的其它分裂次數(shù)的細(xì)胞。采用CFDA SE通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)獲得的檢測(cè)結(jié)果參考右圖。每一個(gè)峰代表一種分裂次數(shù)的細(xì)胞，從右至左的峰通常依次為分裂0次、1次、2次、3次等次數(shù)的細(xì)胞。分裂次數(shù)較多后，分裂0次或1次等沒(méi)有分裂或分裂次數(shù)較少的細(xì)胞會(huì)逐漸減少直至檢測(cè)不到。使用CFDA SE可以檢測(cè)分裂多達(dá)8次或更多次數(shù)的細(xì)胞增殖。
?????目前CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞后通常用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測(cè)。最常用于淋巴細(xì)胞的增殖檢測(cè)，也可以用于成纖維細(xì)胞、NK細(xì)胞等其它細(xì)胞的增殖檢測(cè)，甚至還可以用于細(xì)菌增殖的檢測(cè)。
????CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞呈綠色熒光，檢測(cè)時(shí)的激發(fā)波長(zhǎng)可以選擇488nm，此時(shí)的發(fā)射波長(zhǎng)為518nm，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)可以采用FL1 detection channel。CFDA SE標(biāo)記的細(xì)胞也可以用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。
????CFDA SE標(biāo)記的細(xì)胞無(wú)論在體外還是體內(nèi)都不會(huì)使鄰近細(xì)胞染色。即CFDA SE熒光探針完成標(biāo)記后不會(huì)從一個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到鄰近細(xì)胞。
????CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞僅需5-15分鐘即可完成。對(duì)于不同細(xì)胞，最佳標(biāo)記時(shí)間需自行摸索。
????本試劑盒提供了配制CFDA SE所需的溶液以及CFDA SE進(jìn)行細(xì)胞標(biāo)記時(shí)所需的配套試劑。

如果每個(gè)檢測(cè)樣品的熒光探針標(biāo)記體積為1ml，本試劑盒共可以檢測(cè)2000個(gè)樣品。

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試劑盒組份：

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注意事項(xiàng)：

1)??????CFDA SE配制成儲(chǔ)存液后宜在一個(gè)月內(nèi)使用完畢，最長(zhǎng)不宜超過(guò)2個(gè)月。CFDA SE易被水解，在水溶液中會(huì)很快變質(zhì)。請(qǐng)?jiān)谑褂眠^(guò)程中避免接觸水。在標(biāo)記細(xì)胞的過(guò)程中和水接觸是在許可的范圍內(nèi)的。

2)??????CFDA SE溶劑在4℃、冰浴等較低溫度情況下會(huì)凝固，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。

3)??????熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

4)??????本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

5)??????為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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使用方法：

1.?檢測(cè)前的準(zhǔn)備：

a. CFDA SE儲(chǔ)存液(1000X)的配制：

用試劑盒中所帶的共2ml CFDA SE溶劑溶解CFDA SE，即可配制成CFDA SE儲(chǔ)存液(1000X)。配制完成后分裝到試劑盒所提供的原來(lái)裝CFDA SE溶劑的管子中，并做好標(biāo)記。具體的操作步驟如下：取1ml CFDA-SE溶劑加入到CFDA SE中，充分溶解后取0.5ml至原1ml?CFDA-SE溶劑管子中，再?gòu)牧硗庖还蹸FDA SE溶劑中取0.5ml至該管中并混勻；取另外的0.5ml CFDA?SE至另外一管0.5ml的CFDA SE溶劑管中并混勻。配制好的兩管CFDA SE儲(chǔ)存液均為1000X，-20℃避光保存，最好能-70℃避光保存。-20℃避光保存宜在一個(gè)月內(nèi)使用完畢，最長(zhǎng)不宜超過(guò)2個(gè)月。-70℃避光保存可以適當(dāng)延長(zhǎng)使用時(shí)間。

b. CFDA SE細(xì)胞標(biāo)記液的配制：

準(zhǔn)備適量無(wú)菌的細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)純水，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要配制適量的CFDA SE細(xì)胞標(biāo)記液。例如，取20ml CFDA SE細(xì)胞標(biāo)記液(10X)，加入180ml細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)純水，混勻后即為CFDA SE細(xì)胞標(biāo)記液。配制好的CFDA SE細(xì)胞標(biāo)記液可以4℃保存，長(zhǎng)時(shí)間不用可以-20℃保存。

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2.?標(biāo)記和檢測(cè)：
a.?用1ml CFDA SE細(xì)胞標(biāo)記液懸浮100萬(wàn)至500萬(wàn)細(xì)胞，置于15ml離心管內(nèi)。
b.?用CFDA SE細(xì)胞標(biāo)記液稀釋CFDA SE儲(chǔ)存液(1000X)至2X。例如取2微升CFDA SE儲(chǔ)存液(1000X)至1ml CFDA SE細(xì)胞標(biāo)記液中，混勻后即為CFDA SE儲(chǔ)存液(2X)。
c.?把1ml CFDA SE儲(chǔ)存液(2X)加入到步驟2.a中含有1ml待標(biāo)記細(xì)胞的15ml離心管內(nèi)，輕輕混勻。
d. 37℃孵育10分鐘。
e.?立即在15ml離心管內(nèi)加入約10ml完全細(xì)胞培養(yǎng)液(含血清)，室溫顛倒數(shù)下混勻。
f.?室溫離心去上清，再用5-10ml完全細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌一次。
g.?再加入5-10ml完全細(xì)胞培養(yǎng)液，37℃孵育5分鐘，以促進(jìn)CFDA SE在細(xì)胞內(nèi)的駐留及未反應(yīng)的CFDA SE進(jìn)入完全細(xì)胞培養(yǎng)液。離心去上清，完成最后一次洗滌。
h.?隨后即可按照細(xì)胞的正常培養(yǎng)方法進(jìn)行培養(yǎng)?？梢栽跓晒怙@微鏡下直接觀察標(biāo)記效果，也可以在培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞增殖，或用于特定目的的細(xì)胞示蹤。標(biāo)記的細(xì)胞也可以用于活體動(dòng)物的移植，并用熒光進(jìn)行示蹤。標(biāo)記的細(xì)胞呈綠色熒光。

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特別提醒：

1) 本公司所有產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員用于生命科學(xué)研究，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅。

2)?本公司所有產(chǎn)品必須由合格專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員操作同時(shí)佩戴口罩/手套/實(shí)驗(yàn)服并遵守生物實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)程！